EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica^®6色微滴芯片數字PCR系統上實現cfDNA樣本的超多重分析：

EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit使用TaqMan™ 探針技術用于檢測8個點突變，同時使用drop-off方法檢測24個19外顯子缺失和20外顯子插入（圖1）。

圖1. EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit探針設計，包含TaqMan™探針在每個Exon的位置和標記染料

應用亮點：

☑ EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit單孔實驗可靠高靈敏的檢測32種的EGFR體細胞突變，包含常見的、稀有的活化突變和耐藥突變。

☑ EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit可在naica^®6色微滴芯片數字PCR系統上進行超敏且穩定的EGFR突變檢測，不同位點的檢測限LOD在0.30 - 0.46 cp/µL之間。

☑ 使用Crystal Miner軟件和定制EGFR 6色數據分析模板可快速、直接分析NSCLC患者cfDNA樣本。

單孔檢測NSCLC樣本中>90%的EGFR突變：

液體活檢是對非固體生物樣本的取樣和分析，最常見的是血液。液體活檢是一種微創和直接的采樣方法，可以克服腫瘤的異質性，使用循環腫瘤DNA（ctDNA），用于腫瘤生物標志物分析。

ctDNA檢測需要一種高靈敏度和高可靠性的檢測技術，以精準定量在高背景野生型基因中較低水平的突變基因。數字PCR已成為下一代液體活檢分析的強大技術。

法國Stilla Technologies的naica^®6色微滴芯片數字PCR系統是一種超靈敏的數字PCR技術，能夠同時準確地定量單個樣本中的大量生物標志物，簡化檢測過程，最大限度地減少檢測差異，并顯著縮短實際操作時間。

非小細胞肺癌（NSCLC）是全球癌癥高死亡率的主要原因。表皮生長因子受體（EGFR）突變是NSCLC中眾所周知的致病變異。超多重EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit 可以使用循環游離DNA（cfDNA）檢測NSCLC中90%以上的EGFR突變，包括外顯子18、19、20和21中32個常見的、稀有的活化位點和耐藥位點（表1）。

表1EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit檢測EGFR突變

EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica^®6色微滴芯片數字PCR系統上實現超靈敏檢測

EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit適用于高靈敏naica^®6色微滴芯片數字PCR系統。為確定各EGFR靶點的檢測靈敏度，空白限LOB和檢測限LOD的測定參照美國臨床實驗室標準協會(CLSI) EP17-A2標準(Protocols For Determination Of Limits Of Detection And Limits Of Quantitation; Approved Guideline)。EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit檢測EGFR突變的空白限LOB范圍0.06 - 0.17 copies /µL之間，檢測限LOD范圍0.30 - 0.46 cp/µL（表2）。

表2. 根據CLSI EP17-A2標準測定EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ kit的LOB和LOD（Sapphire芯片，反應體系中的拷貝數cp/ul）

為了評估EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit的靈敏度，在120 cp/µL野生型EGFR DNA 的背景下，采用線性梯度檢測方法檢測EGFR Exon19號外顯子缺失、Exon20號外顯子插入、L858R、G719A、L861Q、T790M、C797S（GC）和C797S（TA）突變，濃度從64 cp/µL稀釋到到0.25 cp/µL(圖3)。EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit可超敏且穩定的檢測出所有突變。

圖3.在野生型EGFR 120 cp/µl(3000copies每25µl)的背景下，測定EGFR Exon19號外顯子缺失、Exon20號外顯子插入、L858R、G719A、L861Q、T790M、C797S (GC)和C797S (TA)突變（理論濃度64cp/µl、32 cp/µl、16 cp/µl、8 cp/µl、4cp/µl、2 cp/µl、1 cp/µl、0.5 cp/µl和0.25 cp/µl）。使用合成的Ultramer™突變DNA模板(大小從97到124個核苷酸)和野生型人類基因組DNA。圖中顯示的是每個突變的≥三次重復的平均值和標準誤差。

EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica^®6色微滴芯片數字PCR系統上具有超高重復性

EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit批間檢測高度重復，不同目標基因定量檢測的RSDs(相對標準偏差)范圍為4.5 ~ 8.6% (N = 12)（圖4）。

圖4.  EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ kit的批間重復性。通過用EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit比較12個不同批次(N = 12)中1個陽性對照樣品獲得的結果測定批間重復性

EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica^®6色微滴芯片數字PCR系統上具有超高特異性

EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit具有高特異性，無假陽性出現（表3）。

表3  使用EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica^®6色微滴芯片數字PCR平臺進行特異性檢測。

使用合成的Ultramer™突變DNA和野生型人類基因組DNA作為模板進行重復反應

EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit與Crystal Miner軟件結合提供的數據分析模板直接生成2D圖(圖5)，并快速獲得高度一致的結果。

圖5. 使用Crystal Miner軟件和個性化的EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit分析模板分析L858R和T790M陽性的NSCLC cfDNA樣本的示例。cfDNA樣本在預期結果和測量結果之間顯示出完美的一致性。x軸和y軸對應相應通道的熒光強度

｜歡迎試用｜

naica️^®六色微滴芯片數字PCR系統開放試用，大家可以撥打電話010-57256059或者官網官微申請，誠摯邀請您到Stilla數字PCR中國技術示范與服務中心參觀，期待與您相見。

naica^®六通道微滴芯片數字PCR系統

法國Stilla Technologies公司naica^®六通道微滴芯片數字PCR系統，源于Crystal微滴芯片式數字PCR技術，自動化微滴生成和擴增，每個樣本孔可實現6熒光通道的檢測，智能化識別微滴并進行質控，3小時內即可獲得至少6個靶標基因的絕對拷貝數濃度。