細胞培養之細胞房的構建及常用設備入門攻略
瀏覽次數:2407 發布日期:2021-8-25
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細胞培養是進行細胞生物學研究時最基礎的實驗,是將離體的組織細胞置于模擬在體內生存的環境中,讓其生長和發育的方法。現代生物技術(基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術等)的發展與細胞培養有著緊密聯系,然而細胞培養對無菌等條件的要求高于普通的微生物培養,實驗習慣和操作要求也有不同的標準,因此細胞房(細胞培養室)在建設時須要遵守一定的基本原則。
01細胞房的構建
在細胞房內進行實驗時需嚴格保持無菌操作,以避免微生物及其他有害因素的影響。工作環境需保持清潔、干燥和無煙塵。一般細胞房有五個工作區:無菌操作區、孵育區、制備區、清洗消毒滅菌區和儲藏區。
潔凈室(區)空氣潔凈度級別表
1、無菌操作區:無菌操作區只限于細胞培養及其他無菌操作,最好能與外界隔離,不能受到穿行或受其他干擾。一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。
- 更衣間:提供更換實驗服、鞋子及穿戴帽子、口罩和手套。
- 緩沖間:位于更衣間與操作間之間。 目的是為了保證操作間的無菌環境,同時可放置細胞培養箱及某些必需的小型儀器。
- 無菌操作間:專用于無菌操作、細胞培養。
2、孵育區:孵育區對無菌的要求雖沒有無菌區嚴格,但仍需保持清潔無塵。因此也應設置在干擾少且非來往穿行的區域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進行。
3、制備區:主要進行培養液及有關培養用的液體制備。
4、清洗和消毒滅菌區:應與其他區域分開,主要進行所有細胞培養器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作。
5、儲藏區:主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養液、培養瓶等設備。此環境同需要清潔無塵。
02細胞房常用設備
1、超凈工作臺:也稱為凈化工作臺。不同的品牌的超凈工作臺工作原理大致相同,通常是將室內空氣經粗過濾器初濾,然后由離心風機壓入靜壓箱,再經高效空氣過濾器精濾。由此送出的潔凈氣流以一定均勻的斷面風速通過無菌區,從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環境。一般使用的凈化工作臺主要有兩種:
2、顯微鏡:倒置顯微鏡是細胞房必需的日常工作常規設備,用于掌握細胞的生長情況并觀察有無污染等。
3、超純水機:細胞培養對水的質量要求較高。細胞培養用水一般要求雙蒸水(0.8MΩ以上),純化時可采用離子交換裝置或蒸餾器。
4、單細胞懸液制備儀:可將組織制備成高活性單細胞懸液或組織勻漿。廣泛應用在單細胞測序、原代細胞培養、流式分析、細胞分選、細胞治療等研究領域。
5、CO₂培養箱:CO₂培養箱是細胞培養中必不可少的設備,它為細胞提供了一個體外培養的舒適環境,如適宜的溫度、CO₂濃度和濕度等。細胞在體外培養時容易受到各種細菌、微生物的污染,因此,CO₂培養箱的滅菌和抑菌能力就顯得尤為重要。RWD D180-P二氧化碳培養箱,具備高達140℃的高溫干熱滅菌系統成為大家首選設備。
6、干燥箱:培養箱的相關器械、器皿在日常清潔中需要消毒、烘干后使用,因此細胞實驗室必須配備干燥箱才行。常見的干燥箱是鼓風式電熱干燥箱,其優點在于溫度均勻、干燥效果較好。
7、冰箱:細胞實驗室中的冰箱分為普通冰箱/冷藏柜和低溫冰箱兩類。其中,低溫冰箱溫度控制跨度在-40℃~-150℃左右,常用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑,如酶、血清以及一些動物樣品等。
8、液氮罐:為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或是細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196℃,因此,需要液氮罐對細胞進行保藏。
9、恒溫水浴:從液氮或超低溫冰箱中取出細胞凍存管需要立即放于37℃水浴中快速復蘇之后才傳代培養,因此,恒溫水浴是細胞實驗室必備儀器。
10、自動細胞計數儀:細胞計數是細胞生物學研究中的一項基本實驗技術,通過細胞計數儀可以精準快速地計算細胞濃度、了解培養細胞狀態、繪制生長曲線等。
11、消毒器:直接或間接與細胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。常用高壓蒸汽滅菌鍋,手提式高壓蒸汽消毒器。
12、器械:主要用于解剖、取材、剪切組織及操作時持取物件。常用的有:手術刀或解剖刀、手術剪或解剖剪(彎剪及直剪),眼科虹膜小剪(彎剪或直剪),血管鉗及組織鑷、眼科鑷(彎、直)等。瑞沃德動物手術器械,質量好助力工作效率提升。
ps:其他設備可參考具體實驗需求。