比黃金貴的蛋白，快到碗里來！

最近一則關于也門的漁民撿到一塊127公斤龍涎香，賣出后售價高達960萬的新聞頻上熱搜。當大家紛紛驚嘆龍涎香的價格堪比黃金的時候，其實，在生物界還有一種遠遠比黃金貴的多的東西，那就是生物研究中不可或缺的蛋白。比如科研用的很多蛋白售價動輒幾千1g是非常常見的，當然也有上萬的，可以說比龍涎香或是黃金貴的多了。
 
那為什么蛋白那么貴呢？因為蛋白的產量是非常低的，尤其是哺乳動物細胞培養得到的蛋白，一般濃度都是極低的。那么，這么珍貴的蛋白，如何能做到盡量的不浪費呢？比如在細胞澄清后進行濃縮和換液的步驟，都會涉及超濾的步驟，而小伙伴們肯定最擔心的就是是否有膜上殘留導致浪費蛋白的問題，那么如何提高蛋白的回收率呢？今天，小賽就從如下幾個方面談談關于蛋白回收的問題。
   
   
不同的膜材質（再生纖維素RC， 聚醚砜PES，三醋酸纖維素CTA，Hydrosart膜）會對樣品的回收率產生影響，并不是一種膜可以適合所有的樣品。因為蛋白樣品是一個復雜的體系，在這個體系中每個因素或是多個因素同時變化都會影響到蛋白的回收率。而不同的膜材質也有不同的結構，帶電性和疏水基團等影響膜吸附的因素。所以，并不是一種膜孔徑的所有膜材質吸附效果都是一樣的。因此如果你的pH和鹽條件、溫度、分子特性等發生變化，就需要重新確認哪種膜才是最適合你的新樣品。
   
  關于超濾孔徑的選擇，很多小伙伴都知道需要1/3法則。即選擇目標蛋白1/3的膜孔徑的超濾產品。但是，現實生活中，我們的蛋白性質往往并不是理想的球形，同時也有不同的緩沖液影響，所以，有的時候，需要選擇比1/3還要小的孔徑才能做到盡量多的回收。

小伙伴們，如果你發現你的蛋白經常回收率波動大，或是漏蛋白，那可能要考慮是不是目前這個蛋白需要更小的膜孔徑才能得到穩定的回收率。
    因為超濾膜的表面是干燥的，同時，上面會有少量的甘油等作為保濕劑。所以，如果直接用來過濾樣品，膜上會吸附一點蛋白樣品。這個時候，就需要通過預處理（鈍化步驟）來減少蛋白的吸附。
 
鈍化步驟      
另外，在濃縮過程中，不均衡的蛋白質、pH/樣品緩沖液條件以及高剪切應力也會導致敏感蛋白降解產生，從而影響回收率。蛋白質的形狀越呈線性，高離心力對結構的不利影響就越大。如果蛋白質呈線性、延長濃縮時間，降低離心力，則會顯著降低蛋白降解的可能。而對于更常見的球狀分子，建議使用最接近最小樣品量的裝置，這樣可確保更大的表面積、減少堵塞概率并會增加作用于樣品上的離心力。
 
 
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