動物細胞分離培養是指從動物活體體內分離組織,利用機械或消化的方法分散成單細胞懸液,然后放在類似于體內生存環境的體外環境中,進行孵育培養,使其生存、生長并維持其結構與功能的方法。動物細胞培養的對象為單個細胞或細胞群,這些細胞很難再形成組織。隨著細胞培養技術和其他技術的迅猛發展,動物細胞培養技術在我們日常生活中的應用也越來越廣泛了。
1.生產天然藥用蛋白(疫苗、干擾素等)
利用動物細胞大規模培養技術生產大分子生物制品始于20世紀60年代,當時是為了滿足生產口蹄疫(FMD)疫苗的需要。后來隨著大規模培養技術的逐漸成熟和轉基因技術的發展與應用,人們發現利用動物細胞大規模培養技術來生產大分子藥用蛋白比原核細胞表達系統更有優越性。
2.基因重組蛋白的臨床應用
哺乳動物細胞培養表達制備治療性重組蛋白質藥物已成為當今生物制藥領域中的主流技術。目前有60%以上的重組蛋白質藥物的生產采用哺乳動物細胞培養技術。哺乳動物細胞制備的蛋白質藥物質量高,它們與天然蛋白質具有相似的理化性質和生物學功能。以默克、基因泰克等國際大公司為代表的大規模流加培養生產工藝,其反應罐體積可以達到10t以上,蛋白表達濃度為1.0~2.0 g/L。我國從2000年開始逐漸發展了該項技術,雖然起步較晚,基礎較差,但經過努力實現了該項技術的突破。
3.制備單克隆抗體
單克隆抗體是將產生抗體的單個B淋巴細胞同腫瘤細胞雜交,獲得既能產生抗體,又能無限增殖的雜交細胞,并以此生產抗體的技術。其原理是B淋巴細胞能夠產生抗體,但在體外不能進行無限分裂;而腫瘤細胞雖然可以在體外進行無限傳代,但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后得到的雜交瘤細胞具有兩種親本細胞的特性。免疫反應是人類對疾病具有抵抗力的重要因素。當動物體受抗原刺激后可產生抗體。抗體的特異性取決于抗原分子的決定簇,各種抗原分子具有很多抗原決定簇,因此,免疫動物所產生的抗體實為多種抗體的混合物。用這種傳統方法制備抗體效率低、產量有限,且動物抗體注入人體可產生嚴重的過敏反應。此外,要押這此不同的抗體分開也極困難。近年來,單克隆抗體技術的出現,是免疫學領域的重大突破。
4.篩選新藥
藥物篩選是針對特定的要求和目的,通過活當的方法和技術(主要有基因組學、蛋白質組學、代謝組學、計算生物學、生物芯片技術、微流控芯片技術等),在一定的可選擇范圍內,進行藥物優選的過程。因此,藥物篩選包括新藥研究過程中的處方篩選,根據特定目的選擇符合要求的藥物。通過規范化的實驗手段從大量化合物或者新化合物中選擇對某一特定作用靶點具有較高活性的化合物的過程。
5.培養轉基因動物
目前,由于細胞培養技術、細朐融合技術、細朐雜交技術以及轉基因技術的創建與相互結合,使得人們能夠在細胞水平操作并改變動物的基因進行遺傳物質的重組。這樣就可以按照人類的需要大幅度地改變生物的遺傳組成,從而使新品種的培育在實驗室中即可完成,可大大縮短育種進程,且使育種工作更加經濟有效。胚胎干細胞的研究成果和克隆羊多莉的問世可以說已為動物遺傳育種開辟了一條新途徑。
6.在生物學基礎研究中的應用
離體培養的動物細胞具有培養條件可人為控制且便于觀察檢測的特點,因而可廣泛應用于生物學領域的基礎研究中。
7.在醫學研究(生理、病理、藥理)中的應用
①動物細胞培養技術可用于遺傳疾病和先天畸形的產前診斷;②現在的一些科學研究已能通過染色體對比分析檢測出易患癌癥的病人,以便進行及早的預防和治療。③細胞培養還可用于臨床治療。
8.培養移植器官
在器官移植方面,通過動物細胞或組織的培養生產適合受體的器官,此法有效解決了供體器官來源的稀缺,同時解決了異體器官發生排斥反應的現象。