原代細胞（Primary cells）是指來源活體組織，經特定分離方法制備而成的初始細胞。原代細胞離體時間短且不經過永生化過程，其生物學特性未發生很大變化，仍保持原有的遺傳特征，可更好地反映細胞在體內的生長狀態，從而獲得與體內生理功能更接近的數據。

1. 基因敲除小鼠原代細胞提取的應用

從某個特定基因敲除（Knock out，KO）小鼠的特定組織中提取原代細胞，則可直接得到目的基因不表達的原代細胞模型，且與我們在KO小鼠上的研究具有更好的承接性，從而讓我們想要證實的實驗目的更具有說服性。

近年來，多個發表在高分期刊如Scientific Reports的文章均有采用KO小鼠的原代細胞進行實驗驗證的案例。另外，KO小鼠的原代細胞還可用于細胞水平的藥物篩選、藥物評價等方面。

2. 基因敲除小鼠原代細胞提取服務平臺

賽業生物完全性基因敲除小鼠是通過CRISPR/Cas9技術，針對靶基因設計和構建gRNA與Cas9表達質粒，造成目的基因的功能區域被敲除，獲得全身所有的組織和細胞中都不表達該基因的小鼠模型。我們目前已經建立了上萬種的KO小鼠模型庫，可為客戶提供多種KO小鼠原代細胞的需求。

（1） 現有海量的基因敲除小鼠資源庫

超16000品系CRISPR-AI敲除小鼠資源庫提供豐富的基因敲除小鼠品系，可大幅度縮短從基因敲除模型構建到原代細胞提取的周期。

賽業生物敲除小鼠資源庫包括心腦血管疾病、神經系統疾病、腫瘤、免疫、代謝等多種疾病相關基因的KO小鼠模型。根據研究目的基因不同，我們可提取的原代細胞類型包括：上皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞、肌細胞，其中每種細胞包含20~30種不同的組織來源，可最大限度滿足不同客戶的需求。

（2）一站式細胞提取、傳代培養及檢測平臺

賽業生物在細胞生物學領域深耕15年，具備豐富的細胞原代提取、培養及檢測經驗。原代細胞均取自新鮮組織，每批細胞都經過免疫熒光/流式細胞方法檢測細胞的復蘇活性和增殖能力等，此外，賽業生物還可提供腫瘤細胞、體細胞常規檢測、免疫學檢測、組織學檢測、干細胞干性分析和血管形成等常規細胞生物學技術服務。

（3）平臺成熟穩定

賽業生物作為一家綜合解決方案提供商，依托超16000品系的KO小鼠資源庫、高效且智能化的模式動物定制平臺、藥物篩選評價小鼠模型平臺、成熟的細胞技術服務平臺等，建立了多位一體的創新性CRO平臺服務網絡，以服務于各種領域的科學研究及藥物研發篩選，并與全球100多個國家和地區的數萬名科學家及企事業單位建立了廣泛的合作，產品和技術已直接應用于包括CNS（Cell，Nature, Science）三大期刊在內的4800余篇學術論文。賽業生物已獲得ISO9001:2015和AAALAC雙認證，確保所有產品和技術服務符合國際標準。

原代細胞提取成功率對個人操作技術和實驗室環境的要求很高，而且還需要對細胞進行鑒定，這也是一項技術上的考驗。

在細胞生物學領域有實力的，缺少賽業在模式動物領域的積累。

在模式動物領域實力的，缺少賽業細胞生物學平臺的沉淀。

從體外細胞實驗到體內動物實驗，找賽業，就對了!

3. 服務流程

☑ 提供細胞信息

☑ 確定服務方案

☑ 協議簽訂

☑ 實驗進行

☑ 細胞鑒定及檢測

☑ 項目交付

4. 成功案例

圖1. 卵巢上皮細胞，20X

圖2. 動脈內皮細胞，5X

圖3. 心房肌細胞，5X

圖4. 動脈平滑肌細胞，5x

參考文獻：

1. Selective deletion of endothelial cell calpain in mice reduces diabetic cardiomyopathy by improving angiogenesis.

Diabetologia. 62(5):860-872. doi: 10.1007/s00125-019-4828-y.

2. TREM2 promotes Aβ phagocytosis by upregulating C/EBPα-dependent CD36 expression in microglia.

Scientific Reports.7:11118 doi: 10.1038/s41598-017-11634-x.