Paper -1：

全球新型冠狀病毒肺炎疫情日益嚴(yán)峻，除了齊心協(xié)力對(duì)抗病毒外，科研人員也在對(duì)新冠病毒進(jìn)行更深入的研究，比如疫苗研發(fā)，感染后患者生理機(jī)能是否會(huì)受影響等。其中，關(guān)于新冠對(duì)生殖方面的影響一直備受關(guān)注，迄今為止，已在精液和精子中檢測(cè)到27種病毒。那么在新冠大流行的背景下，SARS-CoV-2（covid-19）是否存在于精液中呢？如果精液樣本中存在極低病毒載量的SARS-CoV-2（covid-19），一旦被使用，那么必定會(huì)有傳染風(fēng)險(xiǎn)。
 

湖南省疾病預(yù)防控制中心以湖南省人類精子庫(kù)在大流行期間和之后收集的冷凍精液為研究對(duì)象，開(kāi)展了一項(xiàng)回顧性研究，并發(fā)表在《Reproductive BioMedicine Online》雜志上。  研究包括來(lái)自100個(gè)供體的100對(duì)精液和血液樣本，考慮到兩種標(biāo)本的病毒載量均較低，所以研究人員使用了自主改良的一步法-單管巢式定量PCR（OSN-qRT-PCR）進(jìn)行SARS-CoV-2（covid-19）檢測(cè)。此外，為了避免出現(xiàn)“假陰性結(jié)果”，使用Naica™數(shù)字PCR（cd-PCR）對(duì)來(lái)自陰性精液樣品的RNA進(jìn)行了第二輪群體檢測(cè)。

結(jié)果：對(duì)于單個(gè)血液和精液樣本，分別檢測(cè)了核衣殼蛋白（N）和開(kāi)放閱讀框（ORF-1ab）基因，在100對(duì)樣本中均呈陰性。此外，根據(jù)cd-PCR結(jié)果，群體檢測(cè)的RNA樣本中，每孔均> 20,000個(gè)微滴，并且均不存在陽(yáng)性液滴。

結(jié)論：冠狀病毒大流行期間和之后，湖南省人類精子庫(kù)冷凍保存的精液均不含SARS-CoV-2（covid-19），可以安全使用。

Paper -2：

本研究對(duì)已經(jīng)確診的3例新型冠狀病毒肺炎患者按照不同時(shí)間的全血、尿液、糞便標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行qPCR和Naica™數(shù)字PCR（cd-PCR）的核酸檢測(cè)，并比較了兩種方法檢測(cè)各類樣本中2019-nCoV的差異性，提出改進(jìn)2019-nCoV核酸檢測(cè)的綜合策略，為核酸檢測(cè)陰性患者提供更多診斷支持。

本實(shí)驗(yàn)中數(shù)字PCR在病例發(fā)病早、中、晚期標(biāo)本中均能檢測(cè)到陽(yáng)性微滴，而qPCR漏檢了發(fā)病小于5天的標(biāo)本，檢測(cè)到的陽(yáng)性核酸均以中晚期為主。（表2）這也解釋了受檢測(cè)方法靈敏度的局限性，目前大部分假陰性患者都處于疾病發(fā)展的早期。此外，在本次實(shí)驗(yàn)中數(shù)字PCR在重癥病例的三種標(biāo)本中均測(cè)到陽(yáng)性微滴，但因?yàn)檠�、尿和可疑糞便的標(biāo)本病毒載量偏低，qPCR檢測(cè)均為陰性。（表3）

總之，數(shù)字PCR技術(shù)可以有效克服qPCR靈敏度不足的難題，精準(zhǔn)捕捉到病毒載量較低的血液、尿液和可疑的糞便或肛拭子標(biāo)本，是qPCR的有益補(bǔ)充，為幫助臨床醫(yī)生準(zhǔn)確判斷早期感染及患者是否真正痊愈起到了積極的作用，對(duì)2019-nCoV的長(zhǎng)期監(jiān)控有重要的意義。

兩篇Paper均采用了--Naica™數(shù)字PCR平臺(tái)

法國(guó)Stilla Technologies公司的Naica™數(shù)字PCR技術(shù)在進(jìn)行核酸檢測(cè)時(shí)具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。系統(tǒng)利用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片—Sapphire芯片作為數(shù)字PCR過(guò)程的耗材。樣品通過(guò)毛細(xì)通道網(wǎng)格以30,000個(gè)微滴的形式進(jìn)入2D芯片中。3色熒光檢測(cè)儀器，整個(gè)流程只需要2.5小時(shí)，并可進(jìn)行數(shù)據(jù)的質(zhì)控和結(jié)果追溯分析，獲得的數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。

操作流程：

原文鏈接：

Paper1：doi.org/10.1016/j.rbmo.2020.11.015

Paper2：doi:10.3969/j.issn.1006-3110.2020.11.009