如何使用平行生物反應器生產發酵鏈霉菌天然抗菌劑ε-聚賴氨酸
瀏覽次數:1089 發布日期:2020-7-8
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一直以來,大家都覺得小型罐做放線菌、霉菌有難度。小型裝備在某些參數上的確與大型裝備有區別,但是作為R&D工具,結合精巧的實驗設計,小型罐也能發揮它特有的作用。今天,結合迪必爾平行生物反應器,我們來介紹一些成功的應用實例。
江南大學生物工程學院毛忠貴老師和陳旭升老師課題組,自2017年至今使用迪必爾平行反應器進行鏈霉菌發酵產天然抗菌劑ε-聚賴氨酸工藝優化,產量和發酵強度均獲得超過30%以上的提升,分別達到32.22 g/L和5.86 g/L/day(2017年之前)。發酵時間和能耗也得到了有效的降低。他們2017年發表于Process Biochemistry的研究中,迪必爾1.0L 四聯平行生物反應器被巧妙地用于兩級培養+pH沖擊實驗設計。在這個策略中,四聯平行生物反應器中的一個用作一級培養種子罐,另外三個用于考察接種量,接種條件,pH值等參數的影響,如下圖1、2所示。


具體來說,他們進行了三組實驗,每一組實驗均使用四聯反應器中的一個作為種子罐(一級培養),其操作條件具體為600mL裝液量,1~3vvm的空氣流量,300~1500rpm的攪拌,50mL的接種量(24小時種齡),pH保持為6.8,溫度30°C。該操作條件有利于菌體生長,但是對產物合成不利。
他們的第一組實驗利用平行反應器中的其余3個單元考察了接種條件對ε-聚賴氨酸產量的影響。這里的接種條件指的是接種時種子罐的溶氧濃度,分別為95%, 50%, 20%。在這一組實驗中,接種量固定在15%而二級培養反應器的初始pH固定在5.0。第二組實驗選擇的接種條件為DO=50%,接種量15%,考察了初始pH為5.0, 4.0, 3.85是的發酵效果。第三組實驗的接種條件仍然控制在50~60% DO,但接種量分別為10%, 15%和20%。利用迪必爾四聯平行反應器,他們只進行了三次實驗就完成了3因素、三水平的OFAT(one-factor-at-a-time)實驗設計,降低了60%的工作量。與常用的3~5L臺式反應器相比,也大大節省了藥品的用量和產生的廢水的體積。
 8–15)
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2019年,他們再次利用迪必爾的四聯平行反應器對高產ε-聚賴氨酸的鏈霉菌進行pH沖擊的轉錄組學分析。研究成果發表在Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology (2019) 46:1781–1792, 有興趣的同學可以去閱讀一下!


陳旭升、毛貴忠課題組緊盯實現新型生物食品防腐劑ε-聚賴氨酸的高水平產業化這一目標,圍繞ε-聚賴氨酸高效生物制造關鍵技術與產業化、鏈霉菌高效積累ε-聚賴氨酸生理機制兩個研究內容開展工作,通過微生物生理學的基礎研究新發現,發展了一系列菌株改造、發酵調控與優化的新手段,實現了我國ε-聚賴氨酸產品制造技術的國際并跑。他們課題組創建的ε-聚賴氨酸高效發酵技術和先進后提取工藝,在合作企業成功實施了產業化應用,項目建設的生產線是我國產能最大、發酵水平最高和產品質量最優的ε-聚賴氨酸生產線。項目產業化成果,于2019年9月通過由中國輕工業聯合會組織的技術成果鑒定,鑒定結果為國際領先。
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