ICR Swabs對隔離器手套表面低水平微生物的檢測應用
 
在日常的環境監測中，接觸碟法和棉簽擦拭法是對藥品無菌灌裝線進行表面微生物監測的常用方法，在現行的歐洲和美國GMP指南中都均有推薦和介紹，但由于取樣方法、試驗表面和測試微生物的不同，擦拭法和接觸碟取樣在微生物的回收率上會存在一些差異。
這種差異在USP <1116>中也有說明，但兩種方法都可檢測低水平的微生物污染，尤其是在A級潔凈區和隔離器中。
 
目前，使用隔離器進行藥品的生產，已成為制藥行業的一種顯著趨勢，因此對隔離器中的試驗表面進行微生物檢測是十分必要的，尤其是隔離器專用的Neoprene®手套。因此，為證明ICR Swabs取樣拭子可有效的檢測出隔離器Neoprene®手套表面的低水平微生物污染，我們進行了專門的實驗研究。
 
材料和方法
 
將Neoprene®手套試樣清潔并高壓滅菌。取4種試驗微生物在兩種不同稀釋度的菌懸液，在試樣表面接種，使其均勻分布。表1列出了所選取的試驗微生物以及接種在測試表面的菌落數CFU。革蘭氏陰性菌的接種量會更高一些，因為它們對接種表面材料的干燥過程更為敏感。
 
使用平板涂布法在90mm TSA平板上接種，以確定接種在試樣表面的菌落數CFU。

表1：所選取的試驗菌株和接種在100ul菌懸液中的菌落數CFU
 
接下來，在超凈工作臺中，我們將每個表面試樣干燥60分鐘，并用以下不同方法對干燥后的表面試樣上的試驗微生物進行3次重復檢測，操作步驟描述如下，如圖1所示。
 
1）接觸碟法：用胰酪大豆胨瓊脂培養基接觸碟（含卵磷脂、聚山梨酯80、組氨酸和硫代硫酸鈉）對干燥表面試樣進行取樣，在測試表面均勻按壓10秒。所有平板都在30–35°C培養長達七天，并每日進行菌落計數。
 
3）棉簽擦拭法：用已預濕潤的ICR Swabs取樣拭子頭在干燥表面上小心沿水平和垂直方向擦拭取樣。隨后將ICR Swabs頂部的TSB液體培養基擠進拭子頭的試管中，由于干燥可能會延長微生物生長的遲緩期，所以將Swabs取樣拭子30–35°C培養長達七天，并每日目視檢查觀察試管的濁度情況。
 

培養長達7天并每日進行觀察（ICR接觸碟通過菌落數CFU來計數，Swabs取樣拭子通過觀察培養基濁度測定）
 
圖1. 通過TSA w. LTHThio contact-ICR+接觸碟和ICR Swabs取樣拭子對隔離器Neoprene手套試樣表面上的微生物檢測的操作步驟
 
結果和討論
使用ICR Swabs取樣拭子與ICR接觸碟在隔離器Neoprene手套表面取樣的檢測率
 
為確認ICR Swabs取樣拭子可以有效的檢測到Neoprene®手套表面的低水平微生物，我們將試驗中呈陽性的ICR Swabs試樣與ICR接觸碟進行了比較。如圖2所示，ICR Swabs和ICR接觸碟所呈現的陽性（22）樣品總數相同。
 
在Neoprene表面接觸碟和ICR Swabs取樣拭子的陽性試樣數量

圖2：使用ICR接觸碟和ICR Swabs取樣拭子在隔離器Neoprene®手套表面取樣的陽性樣品檢測率及接種試驗菌株的平均菌落數CFU
 
 
在接種特定試驗菌株的菌懸液樣品中，使用接觸碟都檢測到了≥5CFU的情況，ICR Swabs取樣拭子也都為陽性，如金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌樣品（見表2）。在檢測大腸桿菌樣品時，接觸碟有檢測到菌落數為2CFU和1CFU的情況，而ICR Swabs取樣拭子的檢測結果為3組均顯示陽性結果。

表2：ICR接觸碟在隔離器Neoprene®手套表面取樣的微生物菌落數CFU回收率及ICR Swabs取樣拭子呈陽性的樣品數量結果
 
結論
本研究的結果表明，ICR Swabs取樣拭子可有效檢測隔離器Neoprene®手套表面低水平革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的微生物污染，并表現出可靠的生長結果。（這一段需要文本化處理）
 
ICR Swabs取樣拭子和我們常見的棉簽不同。
首先，它使用三層無菌包裝，且最內層包裝可耐受VHP滅菌；
其次，采用聚酯的采樣頭，并且已使用無菌氯化鈉溶液預潤濕，采樣后在表面沒有殘留，使用后表面也無需清潔；
再次，拭子頭部預灌裝了含中和劑的TSB，采樣后折斷閥門，TSB會直接流入下面的試管，不需要再轉移拭子。
最后，按照法規的要求，A級區表面是不得檢出微生物的，ICR Swabs可對表面擦拭進行陰陽性的檢查，可有效的解決拭子采樣回收率的問題，也很好的解決了由于操作步驟復雜所帶來的假陽性的污染風險。
 

（這張截圖里的ICR Swab改為ICR Swab環境監測預制培養基）