水生動(dòng)物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒

一、簡(jiǎn)介

水生動(dòng)物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒適合于快速?gòu)乃�生�?dòng)物組織勻漿液中提取高純度的病毒基因組核酸。試劑盒基于硅膠柱純化技術(shù)，提取過(guò)程中無(wú)需使用有毒的酚氯仿抽提，也無(wú)需進(jìn)行耗時(shí)的醇類沉淀，獲得的核酸可直接用于PCR/RT-PCR、Sorthern雜交/Northern雜交、以及LAMP/RT-LAMP等系列下游實(shí)驗(yàn)。

• 原理

    本試劑盒采用的硅膠柱以高結(jié)合力的玻璃纖維濾膜為基質(zhì)。濾膜在高濃度離子化劑(如鹽酸胍或異硫氰酸胍)條件下，可通過(guò)氫鍵和靜電等物理化學(xué)作用吸附核酸，而蛋白質(zhì)和其它雜質(zhì)則不被吸附而去除。吸附了核酸的濾膜經(jīng)洗滌去除殘留的蛋白質(zhì)和鹽，最后可以用DEPC處理水洗脫濾膜上吸附的核酸，得到的核酸純度高，可直接用于各種下游實(shí)驗(yàn)。

水生動(dòng)物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒基于硅膠柱純化方式。樣品在裂解液中裂解，核酸釋放到裂解液中。在高鹽的環(huán)境下通過(guò)硅膠柱，核酸被吸附在硅膠柱的膜上，而蛋白質(zhì)則不被吸附而去除。后經(jīng)洗滌液洗滌去除鹽分，最后核酸被無(wú)核酸酶洗脫液洗脫。

三、組成

注意：洗滌液在初次使用前加入40ml無(wú)水乙醇，并于室溫保存。

四、保質(zhì)期

水生動(dòng)物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒組份可在室溫下（15-25℃）干燥保存12個(gè)月。長(zhǎng)期保存時(shí)需置于2-8℃。

五、需要準(zhǔn)備的材料和工具

• 無(wú)菌生理鹽水
• 無(wú)水乙醇
• 潔凈的鑷子和剪刀
• 勻漿機(jī)、均質(zhì)袋或一次性研磨棒
• 微量移液器（100-1000μl，10-100μl）
• 無(wú)DNase和RNase的滅菌離心管（1.5ml或2ml）
• 無(wú)DNase和RNase的滅菌Tip頭
• 渦旋振蕩器
• 離心機(jī)（轉(zhuǎn)速≥10,000rpm）

六、從水生動(dòng)物病毒中快速提取DNA/RNA的方法

該方案采用離心操作，適合于快速?gòu)乃�生�?dòng)物組織樣品中提取病毒基因組DNA/RNA。以下步驟都在室溫下進(jìn)行。

• 取適量待檢新鮮樣品組織加入1~5倍體積的生理鹽水進(jìn)行勻漿。取至少500μl勻漿液至1.5ml離心管中。
• 10,000rpm離心5min去除宿主細(xì)胞組織核酸。
• 取100μl上清液至新的離心管中，加入300μl裂解液至上清液中，顛倒混勻，靜置5-10min裂解病毒。
• 加入200μl無(wú)水乙醇至裂解液中，渦旋混勻20秒。
• 把管 A裝在2ml管B中，將裂解液全部轉(zhuǎn)移至管 A中，10,000 rpm離心1min。
• 倒棄管B中的濾液，把管 A裝回管B中，加入400μl洗滌液至管 A中，10,000 rpm離心1min。
• 重復(fù)步驟6。
• 倒棄管B中的濾液，把管 A裝回管B中，10,000rpm離心3min。
• 把管 A裝在新的1.5ml離心管中。

• 加入30-50μl洗脫液至管 A中，靜置1-2min，10,000rpm離心1min，所得溶液即為病毒基因組核酸溶液。若暫時(shí)不用，于-80℃儲(chǔ)存。

七、常見(jiàn)問(wèn)題解答

該列表可能有利于您解決在提取過(guò)程中所碰到的問(wèn)題。若您對(duì)試劑盒存在疑問(wèn)或有良好的建議，又或者您在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中碰到問(wèn)題，都請(qǐng)您聯(lián)系我們。我們將竭盡所能為您排擾解難。

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