UniGel高載量離子交換介質的特點和應用

瀏覽次數：7200　發布日期：2018-2-1　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

UniGel：高載量離子交換層析的新選擇

UniGel 高載量離子交換介質采用區別于傳統離子交換層析基質的表面修飾技術，運用特殊的延長臂和鍵合技術，使其載量獲得極大提升。離子交換（IEX）是根據生物分子表面電荷（種類、數目和分布）差異實現對不同生物分子的分離的方法。常規的離子交換層析介質是通過直接在介質表面鍵合離子交換基團的方法來發揮作用，導致載量較小。UniGel 高載量離子交換介質采用區別于傳統離子交換層析基質的表面修飾技術，運用特殊的延長臂和鍵合技術，使其載量獲得極大提升。

UniGel-30DEAE

單分散聚丙烯酸酯電鏡圖片

UniGel高載量離子交換介質的特點

超高動態結合載量

提供30μm和80μm兩種粒徑，提供從中度純化到精細純化的分辨率選擇

填料裝柱壓縮系數更小（=1.05），遠低于瓊脂糖和葡聚糖凝膠

設計更靈活，允許更高流速和床高度，易于優化放大

更優越的耐堿性，允許更多次地再生和延長使用壽命

更高的生產效率和更低的成本，提升企業收益

應用范圍

UniGel系列高載量離子交換填料主要應用于抗體、蛋白質、多肽等生物大分子的高載量捕獲和大規模純化。尤其是標簽蛋白的三步純化、抗體三步純化。

表UniGel產品基本屬性特征

化學穩定性測試 Stability Test

（一般根據不同產品使用環境來設計）

Uni系列化學穩定性測試結果

層析柱或預裝柱介紹

裝柱流程或方法

裝柱方法

1) 首先計算所裝色譜柱的柱體積 Vc， Vc=Ac × L， Ac=π × r2。

* Vc：色譜柱柱體積；Ac：色譜柱橫截面積；L:色譜柱高度；r：色譜柱半徑。

2) 在原容器中輕輕攪動離子交換層析介質，使其完全分散在液體中形成勻漿液。量取所需原液的質量或體積*。

* 一般情況下，離子交換層析介質在壓力作用下都會被壓緊導致體積收縮，為了獲得緊密的柱床，推薦介質的體積過量一些，一般為柱體積的 1.2 倍左右。

3）傾出介質中 20%乙醇保存液，用 0.5 M NaCl 溶液置換 20%乙醇，平衡過夜。

4）裝柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液調整勻漿濃度為 65 ~ 70%；將勻漿一次性倒入層析柱，沉降平衡后標注高度。

5）將分配器裝入，調節高度使得壓縮系數為 1.05 ~ 1.10；然后啟動輸液泵，用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩定（-2 柱體積）。

6）按照 SOP 進行柱效和對稱性的測定，須達到預定標準。

柱效測定

裝好的色譜柱應使用 2 BV 0.5 M NaCl 溶液平衡，再用 2.0 M NaCl 以 100 cm/h 流速進行柱效測試，具體測試參數詳見下表：

存儲條件

暫時不使用的層析介質需保存在 4～35 ℃ 的 20%乙醇中，并蓋緊瓶蓋，已經裝好層析柱應保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0)中。

清洗方法

為了保持層析柱的性能，若有蛋白質或其他雜質在再生過程中未能有效去除，可執行在位清洗步驟，在位清洗時，也可采用反向沖洗的方法，具體操作步驟如下：
（1）對于通過離子鍵結合過強的蛋白，可用 3 BV 以上的 2 M NaCl 清洗，并用 3 BV 以上的去離子水清洗；
（2）對沉淀蛋白、以疏水性結合的蛋白或脂蛋白，可用 0.2~0.5 M NaOH 清洗（與層析介質接觸時間 1~2 小時），并用 5 BV 以上平衡液和 3 BV 以上的去離子水清洗；
（3）對強疏水性結合的蛋白、脂蛋白和脂類物質，可用 5 BV 以上的 50%乙醇或 30%異丙醇清洗（與層析介質接觸時間 0.5-1 小時），并用 5 BV 以上的去離子水清洗。也可用含非離子表面活性劑的堿性或酸性溶液清洗，如用 0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M 乙酸清洗 1-2 小時，并用 5 BV 以上的 50%乙醇沖洗去除去污劑，然后用 5 BV 以上的純水沖洗（使用高濃度的有機溶劑時，為了避免產生氣泡，應采用逐步增加有機溶劑濃度的方法）。

再生方法

每次層析之后可用 0.5-2 M NaCl 清洗層析柱，除去強結合于層析介質上的蛋白。

UniGel系列載量測試

UniGel系列產品的優勢就是高載量高流速，通過對比同類產品，我們可以更直觀了解UniGel系列的載量優勢。

1.UniGel與傳統離子交換介質

動態載量的對比