細胞周期碘化丙啶紅色熒光流式細胞分析試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

YIJI細胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）紅色熒光流式細胞分析試劑是一種旨在通過細胞流式儀測定細胞中DNA結合碘化丙啶染料程度，來定量DNA含量，以進一步獲取細胞周期分布狀況的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞（動物、人體、植物、昆蟲等）的細胞周期分析。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、細胞分裂、代謝等的研究。產品嚴格無菌，即到即用，分辨率高，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

細胞周期是評價細胞代謝、生理和病理狀況的重要指標。通過DNA結合染料，借助細胞流式儀，測定出DNA含量，根據DNA含量隨著細胞周期的不同而發生變化，來確定和區別細胞周期的不同階段。流式細胞術（FLOW CYTOMETRY）是七十年代發展起來的集計算機、激光、流體力學、細胞化學、細胞免疫學為一體的高科學技術。凋亡細胞是在正常G0/G1峰細胞群前出現亞二倍體峰（sub-G1）細胞群。

產品內容

YIJI清理液（Reagent A）     100毫升

YIJI固著液（Reagent B）     100毫升

YIJI緩沖液（Reagent C）      50毫升

YIJI染色液（Reagent D）    2毫升

產品說明書  1份

保存方法

保存YIJI緩沖液（Reagent C）和YIJI染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent D）避免光照，有效保證6月

用戶自備

HANKS平衡鹽溶液（GMS12022）或PBS緩沖溶液（GMS12033）：用于清洗細胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于細胞脫離

完全細胞培養液（GMS12052）：用于中和胰蛋白酶的處理

15毫升錐形離心管：用于細胞收集的操作

1.5毫升離心管：用于細胞染色的容器

（微型）臺式離心機：用于細胞收集的操作

細胞流式儀：用于細胞熒光分析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑置入冰槽里融化。移出500微升YIJI緩沖液（Reagent C）到新的1.5毫升離心管，加入20微升YIJI染色液（Reagent D）混勻后標記為YIJI染色工作液，置于暗室里，避免光照。然后進行下列操作。

• 準備1瓶25cm²細胞培養瓶的待測細胞，鋪滿率達70％（約1百萬細胞數）
• 小心移出細胞培養液到15毫升錐形離心管（收集漂浮細胞）
• 加入2.5毫升用戶自備的HANKS平衡鹽溶液或PBS緩沖溶液到細胞培養瓶，覆蓋培養瓶表面
• 小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升錐形離心管
• 加入1毫升胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液到細胞培養瓶，鋪滿整個培養平面
• 置入37℃培養箱孵育1分種
• 振動培養瓶，使細胞脫落，然后加入5毫升用戶自備的完全細胞培養液
• 移入到上述15毫升錐形離心管（懸浮細胞從這一步驟開始）
• 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為300g
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升預冷的YIJI清理液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，混勻
• 移入到1.5毫升離心管
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為500g（或2000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升預冷的YIJI固著液（Reagent B），混勻
• 放進4℃冰箱里孵育16小時
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為500g（或2000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去固著液
• 加入500微升YIJI染色工作液，用200微升槍頭上下輕柔抽吸，混勻細胞顆粒群
• 在暗室里37℃培養箱里孵育45分鐘
• 移入到細胞流式儀專用測試管（可放進4℃冰箱里待測）
• 即刻進行細胞流式儀分析：波長488nm氬離子激光出現紅色熒光（或488nm激發波長，610nm散發波長），觀察50000個細胞以上

注意事項

• 本產品為100次操作
• 確保實驗準確性，須收集所有懸浮和貼壁細胞
• 可用35mm培養皿或6孔培養板，細胞總量不得少于30萬
• 操作時，須戴手套
• 孵育時，必須避免光照
• 建議細胞染色完成后，即刻進行細胞流式儀分析。如果放進4℃冰箱里待測，不要超過1周
• 細胞流式儀分析前，須混勻內容物，避免細胞成團
• 細胞檢測量不得少于10000個
• 告知流式儀技術員有關細胞類型
• 本公司提供系列細胞周期分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定熒光清晰