利用核酸提取儀進(jìn)行核酸自動化提取的常見問題分析

來源：洛陽吉恩特生物科技有限公司

        隨著磁珠法核酸提取技術(shù)的日益普及，基于磁珠法核酸提取開發(fā)的全自動核酸提取儀，因其高通量、自動化、減少操作者與試劑及樣本的接觸、減少人工操作引起的誤差，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好等特點(diǎn)使得全自動核酸提取儀越來越被市場所接受。目前市場上基于磁珠法的核酸提取儀大致可分為兩類：移液式和磁棒式。

        本文著重介紹磁棒式核酸提取儀在實(shí)際操作中可能會遇到的問題，及相應(yīng)的解決方案。

1、 手工提取與上機(jī)提取結(jié)果存在顯著差異

       磁棒式核酸提取儀通常采用磁保護(hù)套（攪拌套）來轉(zhuǎn)移磁珠、混勻液體，深孔板底部采用加熱模塊加熱深孔板孔內(nèi)的液體，從而模擬手工操作的流程。手工提取的實(shí)驗(yàn)結(jié)果只能說明手工操作流程及試劑質(zhì)量沒有問題，轉(zhuǎn)移到儀器上后，要綜合考慮。

     磁珠法通用的操作流程：裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫，在手工操作時都可以分步驟實(shí)現(xiàn)，而在上機(jī)操作時考慮到最大限度避免人工操作，通常會把裂解與結(jié)合放在一個孔位內(nèi)進(jìn)行，客戶一般會采用醇類作為結(jié)合液，這樣操作不但稀釋了裂解液，還影響裂解效率，而且由于孔位內(nèi)液體溫度不斷升高，導(dǎo)致醇類揮發(fā)影響結(jié)合效率。此外，儀器一般采用底部加熱模式，孔位內(nèi)的溫度不能以儀器設(shè)置溫度為標(biāo)準(zhǔn)，不同廠家的儀器之間加熱效率也會有所不同，所以單說裂解這一步就需要對上機(jī)的體系進(jìn)行一些優(yōu)化。

2、 儀器孔位之間提取效率有所差異

       磁棒式核酸提取儀通常采用卡片或彈簧鋼珠固定96孔深孔板，底部有凹槽形的加熱條，在進(jìn)行有加熱條件的實(shí)驗(yàn)時，如果深孔板的孔位與底部加熱凹槽貼合的不緊密，會直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這種情況導(dǎo)致孔位間的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定是隨機(jī)出現(xiàn)的。如果發(fā)現(xiàn)某一固定孔位的提取結(jié)果總是與其他孔位相差比較大，可以考慮儀器加熱模塊是否有問題，同時觀察該孔位的上游裂解孔位內(nèi)是否有磁珠殘留，可用空白樣本檢測儀器在孔位間的轉(zhuǎn)移磁珠能力是否徹底。

3、 上機(jī)提取時加入的洗脫液體積與實(shí)際得到的核酸溶液體積存在顯著差異

        目前市場大多數(shù)的磁棒式核酸提取儀的加熱模塊位于96孔深孔板的第一、六、七、十二列，第一、第七列絕大多數(shù)作為裂解結(jié)合孔位使用，而第六、第十二列作為洗脫孔位使用，由于大多數(shù)的提取實(shí)驗(yàn)在裂解結(jié)合步驟需要加熱、而第六列與第七列相鄰，由于熱傳導(dǎo)效應(yīng)的存在，使得裂解加熱時同樣也會導(dǎo)致位于第六列內(nèi)的洗脫液溫度升高，從而導(dǎo)致洗脫液蒸發(fā)，由于洗脫液的體積較小（50ul-200ul），使得實(shí)際得到的核酸溶液體積相比于加入的洗脫液體系有較大差異。

     綜上，在實(shí)際操作中，手工方案一般無法照搬至上機(jī)方案中，需要根據(jù)儀器、耗材、試劑的配合情況進(jìn)行細(xì)節(jié)上的優(yōu)化，為了提高效率，建議廣大用戶使用成熟的核酸自動化提取方案，吉恩特生物現(xiàn)有各類常見生物材料的自動化DNA提取方案，歡迎各位老師與高經(jīng)理交流洽談與討論。                                                                                                       

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