奧美拉唑藥物雜質高分辨質譜快速鑒定

瀏覽次數：2718　發布日期：2017-1-23　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

前言

雜質分析對于藥物的研發至關重要 1。在研究過程中，雜質譜信息能幫助藥物化學家優化合成路線和避免潛在的有毒雜質。在開發過程中，當大量母體化合物存在時，鑒定和表征痕量雜質至關重要，從而促進了高分辨率、高靈敏度和高掃描速度的 HR-MS 儀器和智能化結構鑒定軟件的發展。

為了展示 HR-MS 在雜質分析和結構鑒定方面的能力，本文選用了市售藥物奧美拉唑。本研究采用了賽默飛世爾科技的 Q Exactive Focus 臺式 Orbitrap 質譜儀和數據處理軟件 Mass Frontier 來快速分析和鑒定奧美拉唑中雜質的結構。

方法

材料與試劑

奧美拉唑（CAS# 73590-58-6）購自 Sigma-Aldrich，
產品號 O104-100MG。
乙腈和水來自 Fisher Scientific
乙酸銨購自 Sigma-Aldrich，產品號 73594-25G-F。
甲酸購自 Sigma-Aldrich，產品號 33015-500ml。

樣品前處理

奧美拉唑溶液（0.5 mg/mL）配制在 1:1 乙腈 / 水混合溶劑中。

HPLC 方法

色譜分離采用Thermo Scientific Ultimate3000 UHPLC系統。
色譜柱： Thermo Scientific Hypersil GOLD 柱，2.1mm×150mm，粒徑 3 μm.
柱溫： 35 ℃，流速： 0.5 mL/min，進樣體積： 8 μL
流動相： A - 水； B - 乙腈； C -100 mM 乙酸銨，用乙酸調節 pH 值到 5
梯度洗脫：

質譜方法

質譜分析采用 Thermo Scientific Q Exactive Focus 質譜儀的電噴霧正離子模式。在 70,000 和 35,000 分辨率 FWHM@m/z 200 下分別采集高分辨全掃描一級質譜數據和數據依賴二級質譜數據。

離子源條件：
離子化模式：正離子 ESI
離子源： HESI-II
鞘氣流速： 45 單位 N2
輔助氣流速： 10 單位 N2
噴霧電壓（KV）： +3.5
毛細管柱溫度（℃）： 320
S-lens RF 水平： 50.0
加熱器溫度（℃）： 400
Q Exactive Focus 方法參數：
AGC 目標（全掃描）： 3e6
AGC 目標（MS/MS）： 1e5
碰撞能量： 30， 35% 階梯變化
掃描范圍（全掃描 MS）： 180 到 1200 amu

結果與討論

I. 高分辨率全掃描 -HCD MS/MS 鑒定雜質

采集得到奧美拉唑的高分辨率全掃描和三個最高強度的數據依賴 HCD MS/MS 數據。 HRAM 全掃描和MS/MS 數據提供了分子量和碎片信息。 HCD（高能量碰撞解離）得到了豐富的 MS/MS 碎片和低質量端碎片信息。利用 Mass Frontier 軟件與這些信息互相配合，我們不僅快速檢測出奧美拉唑的主要雜質，而且可靠地測定了相應的元素組成，如圖 1&2 和表 1所示。

II. Mass Frontier 用于未知物的結構鑒定

采用Mass Frontier 的“碎片離子搜索”（FISh）功能處理HRAM 全掃描和 MS/MS 數據，見圖 3-a。 FISh 能輕易識別出與母體化合物具有相同碎片離子的化合物，見圖 3-b，并根據碎片推斷出可能的雜質結構，見圖 7。通過搜索 Mass Frontier的 HighChem 譜圖數據庫， Mass Frontier 的“ Fragment and Mechanism（碎片和機理）”功能可以提供推薦結構的參考文獻。每個推薦結構的“ Fragment and Mechanism”結果對于理解結構來源提供了很好的幫助。將數據結果與“ Fragment andMechanism”進行比較，為推薦結構提供了更多的確認 / 否定標準。

Mass Frontier 的另一個重要特色是“碎片結構的注解圖譜”，用于碎片的自動預測。三個同分異構體的結構鑒定演示了這個功能，見圖 4 和 5。