MTT

什么是MTT，什么是MTT法

 MTT，商品名稱噻唑藍(lán)

 全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide漢語化學(xué)名為 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，一種黃顏色的染料，由于應(yīng)用于細(xì)胞存活率的檢測而被熟知。在細(xì)胞培養(yǎng)中，MTT不僅僅是一個(gè)化學(xué)物品，更是一種實(shí)驗(yàn)方法。

 MTT原理

 MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶標(biāo)儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。

 MTT用途

 MTT主要有兩個(gè)用途  

1.藥物(也包括其他處理方式如放射線照射)對體外培養(yǎng)的細(xì)胞毒性的測定;   

2.細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測定。  檢測原理如上所述，根據(jù)測得的吸光度值(OD值)，來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)(如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越小)。

 MTT實(shí)驗(yàn)步驟 

 普通MTT法實(shí)驗(yàn)步驟：  

1：接種細(xì)胞：用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔1000-10000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積200ul.  

2 : 培養(yǎng)細(xì)胞：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵�求決定培養(yǎng)時(shí)間)。  

3：呈色：培養(yǎng)3-5天后，每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.繼續(xù)孵育4h

 終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10min，使結(jié)晶物充分融解。  

4：比色：選擇490nm波長，在酶標(biāo)儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線。

 MTT檢測方法    

 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果常用酶標(biāo)儀讀取，通過比較不同孔間OD值大小來判斷細(xì)胞生長狀況，以此作為比較藥物毒性大小或者細(xì)胞活性的重要依據(jù)。