常見(jiàn)問(wèn)題分析：

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中Annexin V染不上色或陽(yáng)性率偏低。
 • 確定實(shí)驗(yàn)中的誘導(dǎo)劑是否能產(chǎn)生凋亡。可通過(guò)設(shè)定確切凋亡誘導(dǎo)效果的陽(yáng)性藥物對(duì)照來(lái)排除這一情況。
 • 貼壁細(xì)胞消化不當(dāng)。Annexin V 跟PS 的結(jié)合需要Ca2+離子，結(jié)合液中含有Ca2+，EDTA 的消化會(huì)影響染色，建議使用無(wú)EDTA 的胰酶，或者消化后用PBS洗滌干凈。
 • 細(xì)胞離心用冷PBS 洗滌后，應(yīng)盡量吸干殘余液體，殘余過(guò)多的PBS 中含有磷酸根，會(huì)形成磷酸鈣沉淀，影響Annexin V的染色。
 • Annexin V結(jié)合液瓶蓋要蓋緊密封，長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣后，空氣中的CO2 進(jìn)入后形成CaCO3 會(huì)產(chǎn)生沉淀，從而減少游離的Ca2+，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不佳。
 • 污染其他的緩沖液。如吸取PBS后不更換Tip 頭會(huì)導(dǎo)致游離的Ca2+的減少，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不佳。
 • 陽(yáng)性細(xì)胞的丟失。如果是貼壁細(xì)胞，藥物誘導(dǎo)后漂浮的細(xì)胞要收集起來(lái)合并檢測(cè)，這部分細(xì)胞往往是凋亡陽(yáng)性的細(xì)胞，丟棄會(huì)造成陽(yáng)性結(jié)果偏低。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中陽(yáng)性率偏高。
 • 細(xì)胞本身活力太差。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)誘導(dǎo)凋亡的對(duì)照細(xì)胞經(jīng)染色后AnnexinV+/PI+雙陽(yáng)性的細(xì)胞比例過(guò)高，造成這種結(jié)果的原因可能是細(xì)胞本身活力太差。建議用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)算細(xì)胞的活力，臺(tái)盼藍(lán)拒染的細(xì)胞應(yīng)大于95%。若活力偏低低，建議重新復(fù)蘇細(xì)胞，通常剛復(fù)蘇的細(xì)胞至少要傳代3 次以后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
 • 細(xì)胞操作不當(dāng)。貼壁細(xì)胞消化過(guò)程中反復(fù)劇烈吹打?qū)е录?xì)胞膜破壞，使得假陽(yáng)性偏高。
 • 凋亡誘導(dǎo)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。一般情況下誘導(dǎo)幾個(gè)小時(shí)就可以出現(xiàn)早期凋亡，因此通常不需要處理大于48 小時(shí)以上，誘導(dǎo)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)耗盡，導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)差，假陽(yáng)性結(jié)果偏高。