熒光光學(xué)系統(tǒng)的成像質(zhì)量主要取決于像的襯度和像的亮度，像的襯度是由樣品中激發(fā)出的熒光與背景上觀察到的光之比決定的。背景光包括透過(guò)截止激發(fā)光的濾色片的雜散激發(fā)光，樣品組織成分的自發(fā)熒光和光學(xué)系統(tǒng)的自發(fā)熒光和雜散光，在熒光顯微術(shù)中盡全力要解決的是既獲得最佳的像襯度，同時(shí)又維持像有足夠亮度，這兩者往往是矛盾的。例如用極窄波帶濾色片激發(fā)時(shí)僅利用了極少的光能，背景暗了但熒光亮度也弱了。在應(yīng)用時(shí)，只能兼顧，合理的權(quán)衡以決定取舍。

熒光顯微光學(xué)系統(tǒng)需要優(yōu)先考慮的是：

(1) 光學(xué)系統(tǒng)組成的材料應(yīng)選用在激發(fā)光波內(nèi)無(wú)熒光材料，不但指光學(xué)系統(tǒng)玻璃也包括膠合制造中的膠合劑、切片、蓋玻片和浸液以及密封劑。若有自發(fā)熒光，不但會(huì)增加背景光，有時(shí)還會(huì)混淆觀察熒光圖像。

(2) 光學(xué)系統(tǒng)的參數(shù)選擇中, 應(yīng)將獲得最大光能作為第一考慮因素。

照明系統(tǒng)中集光鏡應(yīng)選用最大的包容角； 采用柯勒照明并使燈絲或弧光像充滿入瞳，以期望獲得高效率的均勻照明。

收集熒光成像的物鏡，因?yàn)橄衩嬲斩扰c數(shù)值孔徑NA 2 成正式，為此作為熒光用物鏡應(yīng)有較大的NA值。目前10×已達(dá)015；20×達(dá)0175；40×達(dá)019；油鏡40×達(dá)113。

雙目鏡筒作為熒光用時(shí)應(yīng)在可見(jiàn)光譜段有較高的透過(guò)率，采用鍍膜技術(shù)可大大地減少光能的損失，它可比一般雙目鏡筒透射率提高一倍，這對(duì)弱熒光物質(zhì)觀察是必須的。

目鏡放大率不宜選大，因?yàn)橄竺嬲斩扰c目鏡放大率平方成反比。若其它條件相同，當(dāng)用613×目鏡時(shí)，照度定為100% ，換上1215×?xí)r，照度約為25%，因此常在4×～ 613×之間選用。

由此表明，用不同物鏡和目鏡組合成同一倍率的顯微鏡時(shí)，象面照度和曝光系數(shù)可相差數(shù)倍，對(duì)于熒光觀察最佳組合是選用低倍率目鏡和NA 大的物鏡最為合適。

(3) 作為熒光光學(xué)系統(tǒng)各組成部件的光譜特性也是至關(guān)重要的，特別是紫外光要通過(guò)的部件，如照明系統(tǒng)，聚光鏡以及物鏡，要關(guān)注紫光區(qū)的透射系數(shù)。聚光鏡要選用透紫外線的材料。照明系統(tǒng)中反光鏡表面鍍鋁比鍍銀好，因?yàn)殇X在UV 和V 區(qū)反射率在90% 以上，而銀僅達(dá)70%。加拿大膠吸收紫外線，在紫外區(qū)通過(guò)處不宜用作膠合劑。

北京汗盟紫星儀器儀表有限公司（www.bjhanmeng.com）