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Western樣品制備方法簡介

瀏覽次數(shù):1229 發(fā)布日期:2015-5-4  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負

一、細胞抗原和組織抗原樣品的制備

1、細胞抗原的處理方法
向收集到的細胞中加入RIPA裂解緩沖液(蛋白酶抑制劑在使用前加入,終濃度為2ug/ml)在冰上裂解30-60min,然后再插入冰盒進行超聲,超聲強度以不產(chǎn)生泡沫為宜,超聲每次2-3s,重復(fù)3或4次,12000g離心3-5min,吸取上清備用。

2、 組織抗原的處理方法
將組織從動物體內(nèi)取出(樣品不宜反復(fù)凍融),取少量(1-2g)放入玻璃勻漿器中研磨成勻漿,然后轉(zhuǎn)入微量離心管中進行超聲,超聲強度以不產(chǎn)生泡沫為準(zhǔn),超聲每次5-7s,重復(fù)5或6次,再12000r/min,離心3-5min,吸取上清備用。
上述兩種方法得來的樣品處理液還要加入1/4體積左右的電泳上樣緩沖液,然后放在沸水浴中加熱3-4min使蛋白質(zhì)變性,方可作為樣品準(zhǔn)備行凝膠電泳。

二、其他樣品的制備

細菌抗原、分泌上清樣品、經(jīng)抽提純化的蛋白質(zhì)樣品可以直接加入電泳上樣緩沖液,然后在沸水浴中加熱3-4min使蛋白質(zhì)變性。

Western樣品制備必備品

廠商

目錄號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

目錄價

Liankebio

LK-WB018

PMSF (100mM)

1 g

60

Liankebio

LK-WB019

RIPA裂解液

100ml

150

Liankebio

LK-WB004

SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)

1 ml*2

30

閱讀原文:http://www.liankebio.com/ProductCenterShow/articleID/2015050004.html

發(fā)布者:杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司
聯(lián)系電話:4006721600
E-mail:network@liankebio.com

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