使用CORTECS C18，2.7 μm色譜柱對辣椒油中的蘇丹紅染料進行LC-MS分析
簡介
蘇丹紅染料是一類重氮偶聯(lián)化合物，不溶于水，可用于蠟、油、溶劑和塑料的增色劑。大部分染料單獨或混合使用可形成與紅辣椒中的天然有色化合物非常相似的顏色（兩種重要的辣椒色素的結(jié)構(gòu)見圖1）。然而，蘇丹紅染料這種潛在致癌物有時會被人們用于為辣椒類產(chǎn)品增色。由于此類用途是非法的，食品中不允許含有任何蘇丹紅染料。因此，人們開發(fā)了靈敏重現(xiàn)的方法以測定典型辣椒產(chǎn)品中的蘇丹紅染料。然而，與新鮮辣椒或辣椒粉相比，辣椒油的基質(zhì)更為復(fù)雜。辣椒油是一種從辣椒中萃取的天然油脂和樹脂的高濃度混合物。在食品行業(yè)中，它可用作強的調(diào)味劑和強的著色劑。在藥物制劑和胡椒粉噴霧劑中，它也可作為辣椒素的來源。由于辣椒油可用作食品著色劑，因此需要高效的分析方法來測定食品中的非法染料。本應(yīng)用紀要展示了一種適用于測定辣椒油中常見的蘇丹紅染料的SPE分析方法。本應(yīng)用紀要還介紹了使用填充有2.7 μm顆粒實心核分析柱的液相方法。這種色譜柱可在較低反壓下實現(xiàn)高效分離，并且與HPLC和UPLC®系統(tǒng)兼容。圖2展示了本研究中使用的染料的結(jié)構(gòu)。
樣品制備
辣椒油（辣椒）購自商業(yè)來源。將0.1 g此樹脂樣品溶于1 mL己烷中。用3 mL己烷活化Sep-Pak硅膠小柱（6 mL，500 mg，部件號WAT043400），然后上樣稀釋樣品。用2 mL己烷清洗小柱，然后用2 mL乙腈/二氯甲烷（5:95）洗脫。蒸干洗脫液，用150 μL甲醇復(fù)溶。SPE采用了具有最低真空度的真空導(dǎo)管，在所有步驟中液體均能以2 mL/min的流速通過小柱。
結(jié)果與討論
結(jié)果見表2。本研究中測定的蘇丹紅染料包括酚類（如蘇丹紅一號）、多酚類（如蘇丹橙G）和胺類（如蘇丹黑）。由于Sep-Pak硅膠小柱能有效保留10種目標分析物染料，因此被選用于SPE純化。雖然回收率一般在75%至100%之間，但多酚類蘇丹橙G的回收率只有約50%。與其它染料相比，此化合物在硅膠SPE小柱上的保留性更強。通過增加洗脫體積或提高洗脫溶劑中乙腈的百分含量可提高回收率。然而，這些步驟都會使最終萃取物中深色基質(zhì)化合物含量變多，從而使純化效果明顯變差。圖3展示了獲得的純化樣品，左側(cè)樣品瓶中為SPE處理前從溶于己烷的1.0 mL樣品中取出的一份150 μL樣品，右側(cè)樣品瓶中為SPE處理后復(fù)溶于150 μL甲醇的樣品。SPE方案不僅顯著提升了萃取物的純凈度，還將萃取物濃縮了將近7倍。
CORT ECS 2.7 μm實心顆粒色譜柱具有出色的色譜性能，并且進樣200多次均保持一致的性能。圖4顯示了加標100 ng/g（ppb）樣品的典型分析色譜圖。本次分析在ACQUITY UPLC H-Class系統(tǒng)上進行。此系統(tǒng)經(jīng)設(shè)計不僅可在UPLC壓力和流速下提供優(yōu)異的性能，而且在諸如本文研究使用的HPLC條件下同樣具有出色表現(xiàn)。由于本研究中觀察到的色譜柱反壓約為3100 psi，因此在壓力上限為4000 psi甚至更高的傳統(tǒng)HPLC儀器上進行分析不會出現(xiàn)問題。對于需要真正UPLC性能的分析人員來說，可將分離轉(zhuǎn)移至CORTECS C18，1.6 μm實心色譜柱上進行分析。
結(jié)論
■ 開發(fā)了一種測定辣椒油中蘇丹紅染料的有效方法。
■ Sep-Pak硅膠小柱可有效純化樣品。
■ CORTECS C18，2.7 μm實心色譜柱具有優(yōu)異的色譜性能，反壓可兼容最傳統(tǒng)的HPLC系統(tǒng)。
