八避迷宮實驗方法交流
實驗方法 T形迷宮實驗方法交流 實驗方法
1)
動物適應(yīng)實驗環(huán)境1周后,稱重,禁食24小時。此后每天八臂迷宮訓(xùn)練結(jié)束后限制性地給予正常食料(據(jù)體重不同,大鼠16-20g,小鼠2-3g),以使體重保持在正常進(jìn)食大鼠的80%~85%。
2)
第二天,迷宮各臂及中央?yún)^(qū)分撒著食物顆粒(每只4~5粒,直徑約3~4mm)。然后,同時將4只動物置于迷宮中央(通往各臂的門打開)。讓其自由攝食、探究10min。
3)
第三天,重復(fù)第二天的訓(xùn)練。這一過程讓動物在沒有很強的應(yīng)激條件下熟悉迷宮環(huán)境。
4)
第四天起,動物單個進(jìn)行訓(xùn)練:在每個臂靠近外端食盒處各放一顆食粒,讓動物自由攝食。食粒吃完或10min后將動物取出。
5) 第五天,將食物放在食盒內(nèi),重復(fù)前一天的訓(xùn)練,一天2次。
6)
第六天以后,隨機(jī)選4個臂,每個臂放一顆食粒;八臂迷宮各臂門關(guān)閉,將動物放在迷宮中央;30s后,臂門打開,讓動物在迷宮中自由活動并攝取食粒,直到動物吃完所有4個臂的食粒。如經(jīng)10min食粒仍未吃完,則實驗終止。每天訓(xùn)練兩次,其間間隔1h以上。
Xmaze動物行為學(xué)軟件會自動記錄以下4個指標(biāo):1工作記憶錯誤(working memory
errors)2參考記憶錯誤(reference memory errors
);3總的入臂次數(shù);4測試時間,即動物吃完所有食粒所花的時間。
A. 傳統(tǒng)T-形迷宮實驗
(1)適應(yīng) 在T-形迷宮臂內(nèi)分撒6粒食丸(45g),讓大鼠適應(yīng)迷宮5min,每天一次,連續(xù)5天。
(2)強迫選擇訓(xùn)練
將大鼠放入主干臂的起始箱,打開閘門,讓大鼠進(jìn)入迷宮的主干臂。隨機(jī)、交替選擇左右兩臂之一放入4粒食丸,同時關(guān)閉另一臂,使動物被迫選擇食物強化臂并完成攝食;每天6次,連續(xù)4天。
(3)延遲位置匹配(delayed matching-to-position,DMP)訓(xùn)練
a)將動物放入閘門關(guān)閉的起始箱,打開閘門,讓動物進(jìn)入主干臂。
b)關(guān)閉一側(cè)目標(biāo)臂,強迫動物進(jìn)入另一側(cè)開放臂以獲得2粒食丸獎賞。
c)立即(最短延遲,少于5s)將動物放回主干臂,開始匹配訓(xùn)練中的第二次訓(xùn)練;此時兩個目標(biāo)臂均開放。動物將兩前肢和至少兩后肢的一部分置于一個目標(biāo)臂時完成“一次選擇”。動物返回到強迫選擇訓(xùn)練時進(jìn)入過的臂則獲得食物獎賞(4粒食丸),記錄一次正確選擇;若動物進(jìn)入另一臂,則沒有食物獎賞,并且將其限制在該臂內(nèi)10秒,記錄一次錯誤選擇。
(4)一次匹配訓(xùn)練結(jié)束后將動物放回籠內(nèi)5~10min(與此同時訓(xùn)練其他動物),再重復(fù)下一次匹配訓(xùn)練。每天8次。
動物連續(xù)兩天的正確選擇次數(shù)達(dá)到15/16,則認(rèn)為達(dá)到標(biāo)準(zhǔn),可以開始實驗。如動物經(jīng)過30天訓(xùn)練仍然達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn),則予以淘汰。
(5)動物訓(xùn)練達(dá)標(biāo)后一天,給予一次匹配訓(xùn)練。所不同的是,強迫選擇訓(xùn)練后,將T-形迷宮旋轉(zhuǎn)180度,再進(jìn)行上述開放臂的訓(xùn)練。這樣做的目的是評價動物是否為定位性操作(有賴于迷宮外信號)或反應(yīng)性操作(不依賴迷宮外信號)。
(6)接著兩天,每天給予10次匹配訓(xùn)練,每次訓(xùn)練間隔為60s,用以評價動物的工作記憶操作。記錄進(jìn)入食物強化臂的次數(shù)和再次進(jìn)入非強化臂的次數(shù)。后者被認(rèn)為是工作記憶錯誤。正常健康年輕的大鼠幾乎每次均能準(zhǔn)確操作。當(dāng)操作穩(wěn)定、且選擇準(zhǔn)確率高(工作記憶錯誤少于10%)時,可進(jìn)行藥物測試或腦區(qū)毀損后的操作實驗。