產(chǎn)品介紹
   本試劑盒提供了從各種來(lái)源的水體樣品中快速簡(jiǎn)便的提取基因組DNA的方法。水體樣品中存在大量微生物，這些微生物被作為重要的生態(tài)指示劑被廣泛應(yīng)用。從水體中提取高純度的基因組DNA是水體環(huán)境值檢測(cè)非常重要的手段。水體樣品中含有大量的抑制因子如腐殖酸、金屬離子等，這些物質(zhì)即使微量存在于純化后的DNA中也會(huì)對(duì)下游反應(yīng)產(chǎn)生影響，如對(duì)PCR、限制性酶切等。因而純化水體DNA的關(guān)鍵在于如何有效的去除水體中的抑制因子。
   采用本公司特有的DNA-only硅膠膜離心柱和溶液配方，搭配Foregene Protease，可以有效的去除水體中各種抑制因子，無(wú)需有機(jī)溶劑抽提或乙醇及異丙醇沉淀，在40分鐘內(nèi)即可完成對(duì)水體樣品中DNA的提取操作。

產(chǎn)品特點(diǎn)
 無(wú)RNA酶污染：無(wú)需額外添加RNA酶即可去除基因組DNA中的RNA，避免實(shí)驗(yàn)室遭受外源RNA酶污染。
 速度快：操作簡(jiǎn)單，水體基因組DNA提取操作在40分鐘內(nèi)即可完成。
 方 便：離心操作均在常溫，無(wú)需4℃低溫離心或乙醇沉淀DNA。
 安 全：無(wú)需有機(jī)試劑抽提。
 質(zhì)量高：提取獲得的基因組DNA片段大、無(wú)RNA、無(wú)RNA酶、離子含量極低，能滿足各種實(shí)驗(yàn)的要求。

操作步驟
使用前請(qǐng)先在Buffer WB中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。
1. 使用直徑為47mm，孔徑為0.22-0.45μm的濾膜對(duì)水體樣品進(jìn)行過(guò)濾，過(guò)濾體積取決于水體樣品的濁度和微生物的含量。用剪刀將1/2張或整張過(guò)濾后的濾膜盡量剪碎，置于2ml離心管中，以便于后面的裂解步驟。 注意：如果濾膜沒(méi)有盡量剪碎會(huì)影響基因組DNA的產(chǎn)率和純度。
2. 向離心管中加入1ml Buffer TE、50μl Lysozyme（配制方法見(jiàn)Page 3）充分混勻后，37℃搖床溫浴15min（轉(zhuǎn)速：180rpm/min）。
3. 13,300rpm(~17,000×g)離心3min，用移液器吸除上清。
注意：應(yīng)盡量吸凈殘留上清，以免影響后續(xù)操作。
4. 向留有沉淀的離心管中加入600μl BufferSG1，上下顛倒充分混勻，加入30μl Foregene Protease，30μl Buffer SG2，上下顛倒充分混勻。 注意：使用前請(qǐng)檢查Buffer SG2是否有沉淀產(chǎn)生，如有沉淀產(chǎn)生，請(qǐng)將溶液置于65℃溫育，直至沉淀溶解后使用。
5. 將離心管置于65℃水浴或金屬浴5min，中間上下顛倒離心管劇烈晃動(dòng)混勻一次，時(shí)間為5sec，至離心管中的樣品無(wú)結(jié)塊，以便和裂解液充分反應(yīng)。否則，將會(huì)影響DNA的產(chǎn)率和純度。
6. 向離心管中加入 600μl Buffer SG3，上下顛倒充分混勻，置于65℃水浴或金屬浴5min，其間上下顛倒充分混勻一次。
7. 13,300rpm(~17,000×g)離心3min，用移液器將上清液轉(zhuǎn)移至新的2ml離心管中，應(yīng)避免吸到沉淀。
8. 向裝有上清液的離心管中加入20μl Buffer SG4，280μl乙醇（96-100%）渦旋充分混勻10s，瞬時(shí)離心收集附著在管蓋和管壁的液滴。
9. 將離心柱放入收集管中，取800μl混合液加入離心柱中，12,000rpm(~13,400×g)，離心1min。
10. 倒掉收集管中廢液，將離心柱放回收集管中，將剩余混合液全部加入離心柱中，12,000rpm(~13,400×g)，離心1min。
11. 倒掉收集管中的廢液，將離心柱放回收集管中，向離心柱中加入500μl Buffer PW，12,000rpm(~13,400×g)，離心1min。
12. 倒掉收集管中的廢液，將離心柱放回收集管中，向離心柱中加入700μl Buffer WB，12,000rpm(~13,400×g)，離心1min。
13. 重復(fù)步驟12一次。14. 倒掉收集管中的廢液，將離心柱放回收集管中， 12,000rpm(~13,400×g)離心1min。
15. 將離心柱轉(zhuǎn)移至新的2ml 離心管中，向膜中央懸空滴加50-200μl已于65℃預(yù)熱的Buffer EB，室溫放置5min，12,000rpm(~13,400×g) 離心1min。

注意：如果希望提高DNA的濃度，可將第1次離心得到的溶液重新加回離心柱中，12,000rpm (~13,400×g) 離心1min。