光譜移液器與光纖分光光度計用于DNA/RNA定量檢測
摘要
在紫外光及可見光光源下，用光譜移液器（WPI-SPT-2）在光纖分光光度計（TIDAS-1）中測量溶液中DNA的濃度（31µg/mL和144µg/mL）。由于只有1厘米光程，借助光譜移液器的使用不需要在此濃度范圍內進行測量前的稀釋，因此可以消除潛在的誤差。由于光譜移液器設計小巧，可以在標準的200µL的PCR小管內對10µL的樣本進行常規檢測，甚至如果在PCR小管中對電極的尖端位置足夠小心，像5µL 這樣小的樣本都可以重復測量。
實驗過程
DNA的標準溶液（Sigma D1626）通過重力方法應用18.2MΩ/cm超純水作為溶劑來制備，標準溶液的濃度在0.0µg/mL和143.9µg/mL 之間。應用光譜移液器對一式三份溶液進行測量，并將光譜移液器連接到裝配紫外及可見光光源的光纖分光光度計上。數據在儀器全波段范圍內（190nm-720nm）每增加1nm收集一次，儀器必須對產生總量80%吸光度的溶液進行測量，所有測量使用18.2 MΩ/cm超純水作為參考溶液。
結果
實驗結果如下表
Table 1: DNA 濃度和吸光度值
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DNA [µg/mL] |
260 nm吸光度 [AU] |
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0.00 |
-0.0061 ± 0.0001 |
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30.83 |
0.5745 ± 0.0011 |
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56.59 |
1.0309 ± 0.0020 |
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85.49 |
1.4497 ± 0.0016 |
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115.66 |
1.7170± 0.0025 |
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143.94 |
1.8280 ± 0.0006 |
因為吸光度與濃度關系遵循Beer-Lambert定律，也即：
A= εlc
預期的吸光度可以從DNA溶液中的濃度計算得來，DNA溶液透光系數ε列為0.020µg/ml*cm。
預期的吸光度可以從DNA溶液中的濃度計算得來，DNA溶液透光系數ε列為0.020µg/ml*cm。
圖1中可以看到通過計算得到的吸光度測量值成一條直線，該線表示在260nm波長時的吸光度測量值。較高吸光度值時，與理論值產生的偏差是由于在光纖分光光度計中散射光干擾的結果。
Figure 1: 吸光度的測量值與理論值
Figure 2: 典型的DNA測量圖 (56.6µg/mL)
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