人穩(wěn)定型骨鈣素（1-43/49）特異性酶免試劑盒

【預(yù)期用途】

這個(gè)ELISA試劑盒是用來(lái)對(duì)人體骨鈣素（1-43）和骨鈣素（1-49）（也被稱(chēng)為N端和中部骨鈣素或穩(wěn)定型骨鈣素）的濃度進(jìn)行定量檢測(cè)。該檢測(cè)項(xiàng)目可以用來(lái)檢測(cè)人的骨形成活性或者成骨細(xì)胞活性，他們與代謝性骨疾病中骨更新率的變化相關(guān)，例如骨質(zhì)疏松，原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥，甲狀腺功能亢進(jìn)，畸形性骨炎以及腎性骨營(yíng)養(yǎng)不良。

【簡(jiǎn)介】

骨鈣素[也叫做骨鈣蛋白質(zhì)（BGP）]是骨骼和牙本質(zhì)中的一種主要的非膠原蛋白質(zhì)。骨鈣素的合成物包括維生素K和維生素D3。新合成的骨鈣素部分釋放到血流中，部分滲入到骨基質(zhì)中。骨鈣素（1-49）及其片段以及骨鈣素（1-43）都會(huì)釋放到血流中去。在血液循環(huán)、肝、腎中，骨鈣素（1-49）降解生成穩(wěn)定型血清骨鈣素（1-43）。當(dāng)抽取人體樣本進(jìn)行體外降解時(shí)，同樣能生成穩(wěn)定型血清骨鈣素（1-43），因?yàn)楣氢}素（1-49) C端的六個(gè)氨基酸不穩(wěn)定，在體外時(shí)，這六個(gè)氨基酸極易在室溫下脫落。一些研究證明，臨床上對(duì)穩(wěn)定型骨鈣素[骨鈣素(1-43/49)] 進(jìn)行測(cè)定，其效果更好，它能對(duì)骨更新率提供更加精確的評(píng)估。

骨鈣素由成骨細(xì)胞產(chǎn)生，在骨骼形成過(guò)程中，它通常作為一個(gè)生物化學(xué)指標(biāo)或者生物指標(biāo)。在用骨形成藥物 (如Forteo) 治療骨質(zhì)疏松時(shí)，通常能觀察到穩(wěn)定型血清骨鈣素水平的增高與骨質(zhì)密度的增加呈現(xiàn)出很強(qiáng)的正相關(guān)。在許多藥物治療研究中，骨鈣素是骨形成的特定療效跟蹤和評(píng)定的首選生化指標(biāo)。

【檢驗(yàn)原理】

這個(gè)ELISA的設(shè)計(jì)，研發(fā)和生產(chǎn)的目的是對(duì)血清或者血漿樣品中穩(wěn)定型人骨鈣素（1-43）和骨鈣素（1-49）進(jìn)行定量檢驗(yàn)。該試劑盒是基于運(yùn)用兩種特異性抗體與人骨鈣素的不同抗原表位結(jié)合的“雙位點(diǎn)夾心”技術(shù)。

將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、和待測(cè)樣品加入鏈霉親和素包被的微孔板中。隨后，加入生物素偶聯(lián)的人骨鈣素N端特異性多克隆抗體和過(guò)氧化物酶標(biāo)記的人骨鈣素20-43區(qū)域特異性單克隆抗體混合物。經(jīng)過(guò)第一個(gè)保溫孵育期后，形成了“生物素抗體-人骨鈣素-HRP單克隆抗體”的“雙位點(diǎn)夾心”結(jié)構(gòu)，該免疫復(fù)合體在特異性“鏈霉親和素-生物素”親和結(jié)合的作用下被吸附到微孔板的內(nèi)壁。游離的單抗和緩沖基質(zhì)則被洗滌劑沖走。微孔板加入過(guò)氧化物酶基質(zhì)（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺，TMB）并經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的反應(yīng)后，測(cè)量吸光度。微孔板內(nèi)壁的免疫復(fù)合體的酶活性與樣本中人骨鈣素的濃度成正比。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品中不同的人骨鈣素濃度的吸光度，按照“點(diǎn)到點(diǎn)”或者“4 - 參數(shù)法”繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測(cè)樣品中骨鈣素濃度可以直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線按測(cè)量到的吸光度得到。

簡(jiǎn)要實(shí)驗(yàn)步驟

1. 添加25µL標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本到指定孔中；
2. 在各孔中添加200µL抗體混合物；
3. 在室溫下，以350 rpm振動(dòng)培養(yǎng)60分鐘；
4. 將各孔清洗5次；
5. 添加200 µLELISA HRP基質(zhì)到各個(gè)孔中；
6. 將微孔板密封，室溫下靜置20分鐘；
7. 添加50 µLELISA終止液到各個(gè)孔中；
8. 讀取450 nm的吸光度。