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正常大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)

瀏覽次數(shù):2498 發(fā)布日期:2011-3-7  來(lái)源:www.pricells.com.cn
                                  正常大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)               

實(shí)驗(yàn)材料:
1. 新生大鼠或小鼠;
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2;
3. 培養(yǎng)用液:含10%的胎牛血清的MEM培養(yǎng)液,補(bǔ)加5μg/ml牛胰島素、2%葡萄糖及抗生素;
4. CFS-Ⅰ刺激因子:小膠質(zhì)細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下一般不分裂,加入星形膠質(zhì)細(xì)胞所產(chǎn)生的活性物質(zhì)或單核巨噬細(xì)胞系體外存活、增值和分化特異的某些生長(zhǎng)因子如CFS后可在體外增值;
5. 培養(yǎng)器具:眼科剪、眼科鑷等;

實(shí)驗(yàn)方法:
1. 切取新生大鼠大腦皮質(zhì)等灰質(zhì)組織,經(jīng)剪碎、胰蛋白酶消化,制成分離的細(xì)胞懸液,培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)兩周左右。制備混合的膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)物;
2. 37℃恒溫?fù)u床上以150r/min搖動(dòng)處理膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)物2h;
3. 收集培養(yǎng)瓶中搖晃下來(lái)的細(xì)胞懸液,將其種植到未用生長(zhǎng)基質(zhì)成分包被的塑料培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行短期培養(yǎng);
4. 棄去未貼壁的漂浮細(xì)胞及懸液。已在培養(yǎng)皿上貼壁的細(xì)胞即為小膠質(zhì)細(xì)胞;
5. 將所獲得的小膠質(zhì)細(xì)胞調(diào)制成細(xì)胞密度為2×105個(gè)/ml的細(xì)胞懸液;
6. 將細(xì)胞懸液種植到培養(yǎng)瓶、皿內(nèi),繼續(xù)培養(yǎng)。屆時(shí)在培養(yǎng)液中加入10%粗制CFS或者25U/ml的純CFS。一周換液兩次;

發(fā)布者:武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司
聯(lián)系電話:027-87490190
E-mail:service@pricells.com.cn

標(biāo)簽: 原代細(xì)胞
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