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細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力測定實(shí)驗(yàn)方法

瀏覽次數(shù):2912 發(fā)布日期:2011-1-10  來源:www.pricells.com.cn
                                          細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力測定

器材和試劑: 
1. 倒置相差顯微鏡,具有10×物鏡;
2. 標(biāo)注體積刻度的試管(圓錐形底);
3. 改良的Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)器;
4. 計(jì)數(shù)器蓋玻片;
5. 袖珍管或等體積的塑料容器,如試管或離心管;
6. 巴斯德吸管(短型和長型);
7. 可調(diào)體積的微量加樣器(100—250μl);
8. 無菌槍尖;
9. 無菌刻度吸管(1—10ml)、洗耳球或自動(dòng)移液裝置;
10. 10g/L臺盼藍(lán);
11. Hanks平衡鹽溶液或儲(chǔ)存培養(yǎng)基;

實(shí)驗(yàn)方法:
1. 準(zhǔn)備計(jì)數(shù)器。輕輕地濕潤中央網(wǎng)絡(luò)區(qū)域的各個(gè)邊,用兩個(gè)拇指的壓力使蓋玻片水平地從邊緣滑動(dòng)。當(dāng)在中央標(biāo)記區(qū)臨近的任何一邊能看見牛頓環(huán)(彩虹色)時(shí),蓋玻片位置正確;
2. 1000r/min離心細(xì)胞懸液5min,棄上清。將細(xì)胞重懸于已知體積的培養(yǎng)基中;
3. 用巴斯德吸管來回吹打細(xì)胞懸液幾次,混勻,確定細(xì)胞均勻分散;
4. 用微量加樣器吸取250μl混勻的細(xì)胞懸液,轉(zhuǎn)入袖珍管。用一個(gè)干凈的加樣器尖吸取等體積臺盼藍(lán)溶液加入細(xì)胞懸液中。用拇指和食指快速輕彈袖珍管幾次使之混勻。立即用一個(gè)巴斯德吸管尖吸取一滴細(xì)胞懸液,輕輕地將其滴在臨近計(jì)數(shù)區(qū)的蓋玻片邊緣上。毛細(xì)作用使細(xì)胞懸液移到蓋玻片下面,填滿中央和邊緣溝之間的區(qū)域。在蓋玻片的另一邊重復(fù)該操作;
5. 將計(jì)數(shù)器放于顯微鏡載物臺上,移動(dòng)載物臺直到將三條平行線界定的25個(gè)小方格的網(wǎng)格位于中央為止。計(jì)25個(gè)小方格內(nèi)的總細(xì)胞數(shù)(染色和未染色的)(它們每一個(gè)又再分為16個(gè)更小的方格便于計(jì)數(shù))。為了避免將同一個(gè)細(xì)胞重復(fù)計(jì)數(shù),只數(shù)三線隔開的壓上線、左手線和中央?yún)^(qū)的細(xì)胞。如果細(xì)胞數(shù)大可用一個(gè)計(jì)數(shù)器;
6. 數(shù)完總細(xì)胞數(shù)時(shí),在相同區(qū)域重復(fù)計(jì)數(shù),只數(shù)藍(lán)染(死)的細(xì)胞。計(jì)算死細(xì)胞的平均數(shù),從總細(xì)胞數(shù)中扣除死細(xì)胞數(shù)得到活細(xì)胞數(shù);
7. 應(yīng)用以下公式計(jì)算細(xì)胞群的存活率:
存活率=活細(xì)胞數(shù)/(活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù))×100%
8. 細(xì)胞懸液的細(xì)胞濃度按照一下方法計(jì)算:
1個(gè)大格(25個(gè)小格)的平均細(xì)胞數(shù)×104=細(xì)胞數(shù)/ml
9. 細(xì)胞懸液總細(xì)胞數(shù)=細(xì)胞數(shù)/ml×總體積
10. 細(xì)胞懸液總的活細(xì)胞數(shù)=總細(xì)胞數(shù)×存活率(%)

發(fā)布者:武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司
聯(lián)系電話:027-87490190
E-mail:service@pricells.com.cn

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