用近重直（小傾角10º）轉頭快速分離RNA
用近重直（小傾角10º）轉頭快速分離RNA
設備：
Hitachi CP 100 MX或Beckman L—100xp 超速離心機日立P90NT 或Beckman NT 90 轉頭，8×5ml ，密封管。
溶液：
A液：0.5％ SDS，20mM Sodium acetate
10mM EDTA (PH5.5)
B液：0.5％ Sodium N—lauroyl sarcosinate (N—月桂肌氨酸鈉)
20mM Sodium acetate ,10mM EDTA (PH5.5)
C液：5.7M CsCl，0.1M EDTA (PH5.5)
離心順序：
1．培養(yǎng)好的E.coli 600液，高速離心，50ml PP或PA管，9200 rpm×20分，4 ℃
2．每管沉淀加1ml A液，再加1ml phenol混勻，60℃，振蕩器上搖5分鐘
3．混勻后注入7ml PP或PA 離心管，每管試劑容量5—5.5 ml （日立R22A高速轉頭，18×7ml ，CR22G或CR21G或其他老型號離心機），9400 rpm , 4℃離心5分鐘。
4．每管取出800ul 上清液加入2.5倍乙醇，再加入1.2 ml 溶液B，最終溶積為4 ml。
5．超速離心管（5PA密封管），每管先加2 ml 混合液，然后用注射器深入離心管底部，每管加入約3 ml 溶液C直到加滿。
6．用日立STF2自動熔封管器封口后，放入P90NT 轉頭85,000rpm ，15℃，離心2小時，加速“5”，減速“7”
注：不可超過8.5萬rpm，否則可能引起CsCl結晶。
7．離心后RNA沉淀在離心管底部，DNA在中下部溶液中。
標簽：
快速分離、RNA
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