PCR方法在人類及動(dòng)植物疾病基因診斷、食品分析和環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域發(fā)揮著舉足輕重的作用，其靈敏度高、特異性好，是目前最精準(zhǔn)的基因診斷方法。然而PCR方法操作起來(lái)較復(fù)雜，對(duì)儀器和人員要求比較高，不適合基層或現(xiàn)場(chǎng)快速診斷，因此在國(guó)內(nèi)的推廣速度并不是很快。

2000年日本學(xué)者Notomi在Nucleic Acids Res雜志上公開(kāi)了一種新的基因診斷技術(shù)，即 LAMP (Loop-mediated isothermal amplification),中文名為“環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)”，受到了世衛(wèi)組織WHO、各國(guó)學(xué)者和相關(guān)政府部門的關(guān)注，短短幾年，該技術(shù)已成功地應(yīng)用于SARS、禽流感、HIV等疾病的檢測(cè)中，在這次甲型H1N1流感事件中，日本榮研化學(xué)公司接受WHO的邀請(qǐng)進(jìn)行H1N1 LAMP試劑盒的研制。通過(guò)榮研公司近十年的推廣，LAMP技術(shù)已廣泛應(yīng)用于日本國(guó)內(nèi)各種病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)等引起的疾病檢測(cè)、食品化妝品安全檢查及進(jìn)出口快速診斷中，并得到了歐美國(guó)家的認(rèn)同。LAMP方法的優(yōu)勢(shì)除了高特異性、高靈敏度外，操作十分簡(jiǎn)單，對(duì)儀器設(shè)備要求低，一臺(tái)水浴鍋或恒溫箱就能實(shí)現(xiàn)反應(yīng)，結(jié)果的檢測(cè)也很簡(jiǎn)單，不需要像PCR那樣進(jìn)行凝膠電泳，LAMP反應(yīng)的結(jié)果通過(guò)肉眼觀察白色渾濁或綠色熒光的生成來(lái)判斷，簡(jiǎn)便快捷，適合基層快速診斷。

可以預(yù)見(jiàn)，在未來(lái)的基因診斷領(lǐng)域，LAMP方法將占據(jù)大壁江山。
目前，在萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)搜索LAMP文章424篇之多。

 

榮研公司在其網(wǎng)站上提供免費(fèi)的LAMP引物設(shè)計(jì)軟件，一次LAMP反應(yīng)只需要30～60min就能完成，因此針對(duì)特定病原的LAMP診斷試劑盒研發(fā)周期較其他的基因診斷方法如PCR、熒光定量PCR等短。配套使用榮研公司提供的LAMP 反應(yīng)液和實(shí)時(shí)渾濁儀將大大提高研發(fā)效率。

LAMP方法優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高（比傳統(tǒng)的PCR方法高2～5個(gè)數(shù)量級(jí)）；反應(yīng)時(shí)間短（30～60min就能完成反應(yīng)）；臨床使用不需要特殊的儀器（試劑盒研發(fā)階段推薦用實(shí)時(shí)渾濁儀）；操作簡(jiǎn)單（不論是DNA還是RNA，檢測(cè)步驟都是需將反應(yīng)液、酶和模板混合于PCR管中，置于水浴鍋或恒溫箱中63℃左右保溫30～60min，肉眼觀察結(jié)果）。

LAMP方法缺點(diǎn)：靈敏度高，一旦開(kāi)蓋容易形成氣溶膠污染，加上目前國(guó)內(nèi)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室不能嚴(yán)格分區(qū)，假陽(yáng)性問(wèn)題比較嚴(yán)重，因此我們強(qiáng)烈推薦在進(jìn)行試劑盒的研發(fā)過(guò)程中采用實(shí)時(shí)渾濁儀，不要把反應(yīng)后的PCR管打開(kāi)；引物設(shè)計(jì)要求比較高，有些疾病的基因可能不適合LAMP方法。

 

目前國(guó)內(nèi)基因診斷常采用PCR方法，涉及到PCR儀，該儀器價(jià)格國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口價(jià)格不一，便宜的2～3萬(wàn)也能買到，貴的20多萬(wàn)。條件比較好的實(shí)驗(yàn)室和國(guó)家機(jī)構(gòu)也有嘗試熒光定量 PCR方法的，該方法技術(shù)含量高，必須使用熒光定量PCR儀，價(jià)格在20～70萬(wàn)不等。

LAMP產(chǎn)品在臨床診斷中是不需要特殊儀器的，但臨床使用的成品試劑盒有賴于和國(guó)內(nèi)擁有毒株的老師合作開(kāi)發(fā)針對(duì)中國(guó)國(guó)情的疾病LAMP引物，在研發(fā)過(guò)程中由于涉及引物的選擇，引物濃度的調(diào)整，及反應(yīng)溫度和時(shí)間的優(yōu)化，需要用一種量化的方式去幫助研究者分析選擇數(shù)據(jù)，因此我們推薦用榮研公司的專利產(chǎn)品LA320C實(shí)時(shí)渾濁儀。

 

本產(chǎn)品操作方面的便捷性

LAMP方法較其他基因診斷方法，其最大的優(yōu)勢(shì)就在于操作的簡(jiǎn)便性及對(duì)儀器設(shè)備和人員要求低。LAMP操作步驟少，只需按照說(shuō)明書(shū)要求將反應(yīng)液、酶、引物和模板按照規(guī)定的量加入PCR管中，置于水浴鍋或恒溫箱反應(yīng)30～60min，通過(guò)肉眼觀察反應(yīng)管是否變?yōu)榘咨珳啙峋湍芘袛嘟Y(jié)果。

 

在日本國(guó)內(nèi)，LAMP診斷試劑盒幾乎已經(jīng)取代了傳統(tǒng)的PCR方法，甚至在每個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)都配有相關(guān)的LAMP檢測(cè)試劑盒。OIE的官方網(wǎng)站上對(duì)于很多疾病的檢測(cè)方法中，LAMP陸續(xù)成為推薦方法。WHO預(yù)測(cè)，到2015年，在疾病的臨床診斷上，LAMP方法將取代目前所用的PCR方法。

 

市場(chǎng)推廣前期：根據(jù)目的不同，主要分為兩類。一是與公司合作開(kāi)發(fā)試劑盒的實(shí)驗(yàn)室，如CDC、出入境、國(guó)家參考實(shí)驗(yàn)室、各高校科研院所及醫(yī)院擁有豐富毒株資源的實(shí)驗(yàn)室。二是廣大科研工作者，由于LAMP方法剛進(jìn)入中國(guó)不久，相關(guān)研究還很少，因此給學(xué)者們發(fā)表高水平文章提供了一個(gè)很好的機(jī)會(huì)和平臺(tái)。