1、 本生燈所使用的燃料在室溫時是氣態，應特別注意管線的安全。
2、 使用前必須檢查所有開關是否在關閉的狀態。確定所有的開關都在關閉的狀態時，才能打開燃氣的總開關。
3、 本生燈不可先開氣后才點火，應于無漏氣情況下，點火后逐漸開氣，遇燃氣漏氣時，須實時檢修。使用時，先以火柴或點火槍等點火工具放在本生燈的頂端燃燒口處點火，接著打開本生燈的燃氣開關至適當大小送出燃氣，此時燃氣即被點燃，若在3 到5秒內未見燃氣被點燃應立即關閉燃氣開關，待十秒后再重復前述點火的動作，若仍未能點燃，可再重復點火程序。
4、 通常燃氣輸送的管線過長時，初次點火較不易被點燃，因為此時燃氣可能尚未送達本生燈處。燃氣點燃時焰色應為黃紅色，此時若火焰過大或過小都應立即調至適宜的程度。若在多次重復點火的動作后仍未能點燃，此時應仔細觀察，若未聞到燃氣味，代表燃氣的供應有問題，應檢查燃氣開關是否正�；蛉細馐欠裼猛�。若聞到燃氣味，則應檢查是否空氣開關未關閉、點火槍不正�；虮旧鸁舻某鰵饪谟卸氯�的情形。待情況排除并且燃氣味排除后才可再次點火。
5、 燃氣點燃后應接著打開空氣開關�？諝獾乃腿肟墒谷紵�變得較完全，此時火焰會漸呈藍色。本生燈在使用時要注意火焰的調整，當空氣量不夠時，火焰會呈黃色，有時甚至會產生黑煙，此種黃色火焰不僅溫度較低，而且因燃燒不完全，黃色焰區中的細小碳粒會附著在被加熱物外壁上，要改善此現象只要增加空氣的進入量，即可將火焰的焰色調到淡藍色完全燃燒的狀態，此時火焰溫度在約焰高二分之一到三分之二的高度處溫度最高，當空氣的輸入量適宜時，火焰的顏色會呈現完全的藍色，而且燃燒的溫度也會增高。
6、 燃氣不用時應立即關火。關閉燃氣時宜先關閉空氣開關再將燃氣關上。
7、 本生燈有火時，應隨時都有人在旁邊，不可任由本生燈燃燒而無人看管。實驗結束時應先將總開關關上，再將管線內的燃氣以本生燈點火燒光，以保證安全。
8、 使用本生燈時，若不小心失火，應立即關閉燃氣開關，再做其它搶救措施。
9、 在使用本生燈時，遇風大或天冷時，不可將門窗緊閉，以免空氣不足產生一氧化碳中毒。
10、在生物安全操作柜內禁止長時間使用酒精燈和火焰式的本生燈，因為持續燃燒所產生的熱效應會干擾生物安全操作柜內的氣體層流，且火焰熱氣會大大縮短HEPA高效濾層的壽命。
11、使用后必須關掉氣體開關。