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液質(zhì)聯(lián)用儀使用經(jīng)驗(yàn)(教訓(xùn))交流總結(jié)

瀏覽次數(shù):4828 發(fā)布日期:2008-3-26  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
一、做液質(zhì),加離子誘導(dǎo)劑得是揮發(fā)性的,生物堿用甲酸或乙酸

二、我認(rèn)為要維護(hù)好儀器
首先流速不能過(guò)大,液質(zhì)是不能承載過(guò)大流速的;
其次電壓不要加到極限,尤其是正負(fù)離子轉(zhuǎn)換時(shí)要適當(dāng)調(diào)整;
最后是做完樣一定要及時(shí)沖洗和吹掃管路。

三、LC和MS的條件優(yōu)化是成功的關(guān)鍵。

四、
1、由于液質(zhì)的流速較小(ESI一般為0.2ml/min),所以配置樣品的溶劑強(qiáng)度不能太大,盡量小于起始比例,否則,會(huì)出現(xiàn)保留時(shí)間偏移等問(wèn)題。

2、如果在液相上摸好的條件,注意尤其是流動(dòng)相的組成要轉(zhuǎn)化成合適LCMS分析的。

3、磷酸鹽及其他不揮發(fā)緩沖鹽在離子源會(huì)沉淀并堵塞毛細(xì)管等,要更換成可揮發(fā)的有機(jī)緩沖鹽。

4、緩沖鹽會(huì)導(dǎo)致離子抑制,因此要控制緩沖液的強(qiáng)度,<10mM。

5、去污劑、表面活性劑會(huì)有離子抑制現(xiàn)象發(fā)生, 表面活性劑產(chǎn)生的加合物和離子簇會(huì)干擾質(zhì)譜數(shù)據(jù),因此作液質(zhì)聯(lián)用儀時(shí),不要使用洗滌劑清洗玻璃器皿等容器,如果一定要用,建議超聲清洗多次。

五、
要做好質(zhì)譜的維護(hù)工作,就得從小處著手。比如分析的樣品必須要干凈,這樣既可以保護(hù)色譜柱,也可以防止污染質(zhì)譜;分析了大量的生物樣品后,沖洗系統(tǒng)時(shí),先用高比例的水相沖洗,把源也給洗一下,然后再換用高比例的有機(jī)相,這時(shí)要把柱后管路從源上拿下來(lái),避免柱中的雜質(zhì)給沖進(jìn)質(zhì)譜……細(xì)節(jié)很多很多,大家在日常應(yīng)用中盡量注意和避免就可以了。

六、
做液質(zhì)三年了,島津、waters、ABI和finigan的都摸過(guò),經(jīng)驗(yàn)談不上,說(shuō)點(diǎn)自己的注意點(diǎn)吧。

1.前處理:樣品一定要干凈,不管是為了質(zhì)譜還是為了保護(hù)柱子,生物樣品提取的好些,如果直接沉淀,一定要注意,盡量高轉(zhuǎn)速12000rpm以上,低溫離心,最好離2次(保險(xiǎn)一點(diǎn)),轉(zhuǎn)移樣品也要仔細(xì),從中間慢慢吸,有時(shí)會(huì)有漂浮物,島津的質(zhì)譜好像做直接沉淀的源比較容易堵,Waters的好些。

2.樣品濃度:質(zhì)譜是靈敏度很高的儀器,進(jìn)樣濃度一定不能太高,1-2ug/ml已經(jīng)可以啦,太高的濃度對(duì)儀器來(lái)說(shuō)比較容易造成殘留,而且定量也會(huì)不準(zhǔn)啦。

3.流動(dòng)相:流動(dòng)相中盡量加易揮發(fā)的鹽,盡量不要加表面活性劑之類的,容易離子抑制,如果遇到離子抑制,可以試試把你的樣品峰往后推推或者改變提取方法,也可以試試用APCI源。如果你的液相是低壓混合的,盡量不要跑梯度,那樣很費(fèi)時(shí)間,如果沒(méi)辦法,一針又要走很長(zhǎng)時(shí)間的話,可以考慮切換,只測(cè)樣品出峰前后的那段時(shí)間,這樣可以保護(hù)質(zhì)譜。但是如果你用粗柱子,較高流速的也可以考慮跑梯度,如API4000,但要盡量減小死體積。

4.沖洗:沖柱子自然不用說(shuō)了,低有機(jī)相和高有機(jī)相分別沖一定時(shí)間(各至少半個(gè)小時(shí)以上吧),柱子保存在高有機(jī)相中。做完試驗(yàn),沖源也是很重要的,也是低有機(jī)相和高有機(jī)相沖,但是時(shí)間可以不用那么長(zhǎng),你可以先沖源再?zèng)_柱子,或者兩者分開(kāi)沖,個(gè)人覺(jué)得分開(kāi)沖好些,這樣柱子上的臟東西就不會(huì)進(jìn)到源里面去啦。沖源的時(shí)候氣可以關(guān)小些。

七、
1、樣品必須過(guò)0.22um濾膜過(guò)濾,不得有顆粒物;
2、上樣的溶劑,必須是色譜純,最好和你的流動(dòng)相比例一致;
3、反相體系,不允許用正己烷之類極性弱的溶劑溶解樣品并上樣。
4、水,自然是純凈水了;
5、樣品不允許含有金屬離子、表面活性劑(不要用洗潔精洗瓶子)、磷酸鹽、硼酸鹽等不揮發(fā)鹽;
6、淋洗液緩沖溶劑必須用可揮發(fā)的,如乙酸、乙酸銨、氫氧化四丁基銨等,色譜純級(jí)別。
7、樣品pH5~7嚴(yán)禁含有無(wú)機(jī)或有機(jī)強(qiáng)酸強(qiáng)堿。
8、六通閥處變?nèi)ǎ詈冒褯](méi)有信號(hào)的區(qū)域,切換到廢液,這樣減少源的污染
9、定期振氣、清洗離子源,換油

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