透射電鏡是電鏡技術中應用廣泛的一種電子顯微鏡,它是利用透射電子成像的。透射電鏡觀察樣品能獲得高分辨率的超微結構圖像為生命科學研究、臨床醫學研究等提供必要的數據依據。
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超薄切片機Leica EM UC7儀器的性能指標
1.利用重力切片,不用馬達驅動切片。
2.切片窗口0.2-14mm可調,切片速度0.05-100mm/s旋鈕控制,切片厚度0-15000nm旋鈕控制,步長控制0.1-15μm。
3.全馬達操控刀臺,東西方向可測量,并帶自動修塊功能。
透射電鏡HITACHI HT7700儀器的性能指標
1.加速電壓:120kV;分辨率:0.204nm。
2.束斑尺寸:高反差模式0.5至2µm(5步);高分辨模式0.5至1µm(5步)。
3.底插入式樣品臺,2048*2048像素。
4.將透射電鏡操作統一于顯示器上,無需直視熒光板,實現了無膠片化,可以在明亮的室內進行觀察。
送樣要求:以下所有樣本必須盡量新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結冰!
1、動物組織樣本
①1-3min內取樣,取樣組織2mmX2mm大小,盡量薄。如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內固定半小時左右待組織變硬以后再修整組織進行后固定。超出此范圍后組織會無法完全固定,后續實驗無法完成,務必請重視此過程
②取材時盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質;觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。
③取材時一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷,刀片要鋒利避免挫傷組織。
④組織取下后立即投入電鏡固定液內室溫固定2h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。4°時樣本可保存1個月左右
2、植物組織樣本
①取材要求同動物組織樣本。
②組織投入固定液后需要進行真空抽氣讓組織沉底,如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進固定液內,組織不能漂浮在固定液表面。
3、細胞樣本
貼壁細胞:
方法一:
①培養好的細胞棄培養基,加入2.5%的常溫戊二醛固定液。
②常溫固定5min左右,用細胞刮(或軟橡膠蓋切得平整小方塊)沿一個方向輕輕刮下細胞,切記不要反復刮,避免細胞刮破。
③用巴氏吸管把細胞液吸入離心管內,放入離心機(不超過3000轉),離心2min左右,細胞團要有綠豆大小。
④棄固定液后加新的電鏡固定液,把細胞團輕輕挑起,懸浮于固定液中。
⑥室溫避光固定30min,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
方法二:(對細胞形態沒有要求的)
①培養好的細胞棄培養基,加入胰酶。
②胰酶消化好后(時間不宜過長),用培養基終止消化,用吸管把細胞吹下來。吸入離心管,離心(不超過3000轉),2min左右,細胞團要有綠豆大小。
③棄上清,加入2.5%的常溫戊二醛固定液,把細胞團輕輕挑起,懸浮于固定液中。
④室溫避光固定30min,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
懸浮細胞:離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀綠豆大小,棄培養基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
4、細菌樣本
長于固體培養基的細菌:連帶著培養基一起挑下細菌放于電鏡固定液內室溫固定2h,再轉移至4°保存, 4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
懸浮細菌孢子等:離心收集細菌要肉眼可見細菌沉淀綠豆大小,棄培養基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
5、病毒
破碎組織細胞,粗離心去除細胞碎片取上清,超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒,遠距離-80°凍存運輸,近距離4°保存運輸,盡快滴片做負染后及時電鏡觀察拍照。