2022年12月22日，IPHASE/匯智和源技術(shù)部總監(jiān)王經(jīng)理就原代肝細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與應(yīng)用在北京總公司召開(kāi)了研討會(huì)，旨在探討出肝細(xì)胞的分離方法及應(yīng)用為廣大客戶(hù)在后期做實(shí)驗(yàn)時(shí)提供有利的幫助！以下是會(huì)議主要內(nèi)容。

肝臟是藥物代謝的重要器官，體外代謝模型多以肝臟為基礎(chǔ)。常用的體外模型有肝微粒體、肝S9、肝胞質(zhì)液、原代肝細(xì)胞、肝組織切片、重組人代謝酶等。其中，原代肝細(xì)胞因具有較好的體外試驗(yàn)重現(xiàn)性，基本維持了肝臟的代謝功能，特別是較好的保留了與體內(nèi)一致的酶水平，成為了體外藥物試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，廣泛應(yīng)用于藥物代謝與毒理學(xué)研究中。

1    原代肝細(xì)胞及其應(yīng)用

原代肝細(xì)胞(Primary hepatocytes)是指從動(dòng)物肝臟取出后立即培養(yǎng)的肝細(xì)胞。原代肝細(xì)胞作為一種體外模型，具有其它體外模型不可替代的優(yōu)點(diǎn)：

①與體內(nèi)環(huán)境保持一致，酶量和輔助因子水平都是正常的生理濃度，可以在接近生理狀態(tài)的的情況下研究藥物的代謝和毒性；

②較好保留和維持了肝細(xì)胞的完整形態(tài)和肝細(xì)胞體外代謝活性，真實(shí)反應(yīng)了體內(nèi)的代謝情況。

隨著技術(shù)水平的不斷提高，原代培養(yǎng)的動(dòng)物和人肝細(xì)胞已廣泛應(yīng)用于藥物研究：

①探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動(dòng)力學(xué)的研究；

②評(píng)價(jià)藥物和外源性物質(zhì)對(duì)肝臟中細(xì)胞色素P450酶誘導(dǎo)作用并探討其誘導(dǎo)機(jī)制；

③預(yù)測(cè)和解釋藥物與藥物之間的相互作用；

④研究藥物的細(xì)胞毒性等。

2    原代肝細(xì)胞分離

肝細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，具有豐富的酶系及多種特異性功能，被廣泛用于生物化學(xué)、實(shí)驗(yàn)性肝損傷、藥代動(dòng)力學(xué)、 毒理學(xué)和致癌作用等研究。然而，分離并培養(yǎng)出高活性的原代肝細(xì)胞成為了關(guān)鍵步驟，分離的原代肝細(xì)胞在體外是否能夠存活

目前，原代肝細(xì)胞分離常用的方法有直接剪切法、組織塊消化法和兩步膠原酶灌流法等。其中，兩步膠原酶灌流法因其對(duì)肝細(xì)胞損傷作用較小，在膠原酶消化細(xì)胞前使用了螯合劑，提高了肝細(xì)胞的產(chǎn)量和活力，分離的肝細(xì)胞數(shù)量多且活力好，成為了分離原代肝細(xì)胞的經(jīng)典方法。

兩步膠原酶灌注法先使用無(wú)鈣灌流液灌注，無(wú)鈣灌流液作為預(yù)灌液，可以將肝臟內(nèi)的殘留血液灌注出，除去或者減少細(xì)胞間的鈣離子，以減少細(xì)胞間的粘著力。經(jīng)無(wú)鈣灌流液灌注后再使用含酶灌流液進(jìn)行灌注把組織中的細(xì)胞釋放出來(lái)。膠原酶在消化肝的同時(shí)解除了細(xì)胞間接觸抑制或活化了潛在的蛋白激酶、生長(zhǎng)因子或受體，使肝細(xì)胞能逐漸適應(yīng)消化分離過(guò)程中所發(fā)生的細(xì)胞、外環(huán)境及細(xì)胞的各種改變，這些改變對(duì)離體肝細(xì)胞修復(fù)、生長(zhǎng)及功能有重要的促進(jìn)作用，有利于肝細(xì)胞的培養(yǎng)。

3    原代肝細(xì)胞產(chǎn)品

IPHASE/匯智和源憑借多年的技術(shù)能力和技術(shù)經(jīng)驗(yàn)的積累，不斷摸索和優(yōu)化原代肝細(xì)胞分離過(guò)程，現(xiàn)已形成猴、犬、大鼠、小鼠等原代肝細(xì)胞產(chǎn)品。 4    原代肝細(xì)胞優(yōu)勢(shì)

l  安全性

分離原代肝細(xì)胞所用動(dòng)物均經(jīng)過(guò)傳染源檢測(cè)，使用安全、更放心。

l  純度高

生產(chǎn)的原代肝細(xì)胞經(jīng)分離純化后純度高，狀態(tài)好。

l  活性好

原代肝細(xì)胞，復(fù)蘇存活率可達(dá)90%以上，所有種屬原代肝細(xì)胞均經(jīng)過(guò)體外代謝質(zhì)控，代謝活性強(qiáng)。

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