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3874 次 MIQE指南：RT-qPCR中的定量策略詳解 2023-2-13
1. 簡介MIQE (Minimum Information for Publication of Ouantitative Real-Time PCR Experiments) 指南是關(guān)于qPCR實驗發(fā)表文章時所必需的實驗信息提出的最低限度的標(biāo)準。目的是讓作者能夠設(shè)計和
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1151 次 染色質(zhì)免疫共沉淀ChIP實驗的詳細實驗步驟 2023-2-10
染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)，是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的經(jīng)典方法。開始 ChIP 之前要考慮三件事（1）為您的實驗查找適合的抗體（2）優(yōu)化染色質(zhì)剪切（3）評估您
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2823 次 qPCR反應(yīng)實驗操作流程中的常見問題及解答 2023-1-11
實時定量PCR技術(shù)（real-time PCR）也叫qPCR（Quantitave PCR），是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過特定數(shù)學(xué)原理對未知模板進行定量分析的方法。
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1058 次 如何有效避免無處不在的PCR污染 2023-1-3
前言在PCR檢測過程中，不可否認的是，沒有任何檢測是100%準確的，比如我們可能也曾聽過假陽性這個名詞，那為什么會出現(xiàn)假陽性呢?這其實跟實驗操作過程造成的污染相關(guān)，在實驗開展過程中，主要有
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3835 次 RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)詳解 2022-12-27
前言RT-PCR就是逆轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse transcription PCR）或稱為反轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse transcription-PCR，RT-PCR），是以RNA為材料應(yīng)用于PCR擴增中的一種實驗方法。首先通過逆轉(zhuǎn)錄酶將總RNA或信使R
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1748 次 PCR蓋緊蓋子試劑蒸發(fā)問題詳解 2022-12-6
導(dǎo)讀在PCR實驗中，我們加完反應(yīng)體系后，都會認真仔細的蓋好蓋子，并反復(fù)確認已經(jīng)蓋好了蓋子，以避免出現(xiàn)試劑蒸發(fā)的情況。可是有時候我們也會有一些疑惑：明明已經(jīng)確認蓋子蓋緊了，實驗結(jié)束后，還
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4358 次 熒光定量PCR對照詳解 2022-11-4
前言吾日三省吾身，定量實驗做對照了嗎？在熒光定量PCR實驗中遇到?jīng)]有曲線、曲線異常等情況，我們總是會在第一時間去看陽性對照和陰性對照的擴增情況來分析原因。由此可見，實驗中做對照的重要性
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2510 次 PCR耗材選擇的問答詳解 2022-10-25
導(dǎo)讀俗話說的好，工欲善其事，必先利其器。耗材的選擇對得到滿意的PCR實驗結(jié)果至關(guān)重要。在分析PCR結(jié)果時，我們往往側(cè)重于對引物、酶的濃度、溫度和時間的分析，卻忽略了PCR耗材也是影響因素之一
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2171 次 多重PCR技術(shù)要點解析 2022-10-20
多重PCR概述多重PCR(multiplex PCR)，又稱多重引物PCR或復(fù)合PCR，它是在同一PCR反應(yīng)體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應(yīng)，其基本原理與常規(guī)PCR相同，區(qū)別在于多重PCR反應(yīng)體
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2734 次 Taq酶選型三要素：擴增效率、酶動力、靈敏度 2022-9-5
導(dǎo)讀目前國內(nèi)市場上銷售的熱啟動Taq酶的品牌很多，但真正高質(zhì)量的熱啟動Taq酶并不多，面對這么多的熱啟動Taq酶產(chǎn)品，我們應(yīng)如何選擇？首先，選擇擴增效率高的熱啟動Taq酶耐受性好的Taq酶反應(yīng)體系
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4534 次 qPCR體系優(yōu)化和常見問題解析大全 2022-8-15
前言聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）是用于擴增特定DNA片段的分子生物學(xué)實驗技術(shù)。實時熒光定量PCR（以下簡稱qPCR）作為第二代PCR技術(shù)，自1996年推出以來，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于基因表達分析、病原微生物檢測、
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4117 次 普通PCR引物與qPCR引物的對比與選擇詳解 2022-8-3
導(dǎo)讀說起引物，大家都再熟悉不過了。引物，在核苷酸聚合作用的起始時，可以刺激合成另一種大分子，并與反應(yīng)物以共價鍵形式連接的序列。在核酸化學(xué)中，引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段，可結(jié)合在
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4458 次 熒光定量PCR實驗中熒光標(biāo)記的選擇詳解 2022-7-22
熒光定量PCR技術(shù)是將常規(guī)的PCR和熒光檢測技術(shù)相結(jié)合，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，以此實現(xiàn)對初始模板的定量分析。熒光定量PCR技術(shù)作為當(dāng)今生物學(xué)研究的重要手段之一，在基礎(chǔ)科學(xué)、生
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1701 次 qPCR實驗之核酸提取MIQE明確的要點詳解 2022-6-22
前言MIQE是描述評估qPCR實驗所需的最小信息，該指南是稿件投稿時需要同時提交的一個清單。通過作者提供相關(guān)的實驗條件和實驗特點，審稿人可以評價實驗所用方法的可靠性。另外提供詳細的實驗所用
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1364 次 qPCR實驗中安全科學(xué)地取材操作詳解 2022-6-10
規(guī)劃一個qPCR實驗時，最先碰到的問題就是研究目的和材料的選擇。要想做好一個qPCR實驗首先要根據(jù)目的選好材料。以目標(biāo)為導(dǎo)向的取材研究目標(biāo)的設(shè)立是非常重要的一個起始環(huán)節(jié)，所以對于樣本取材要
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3527 次 如何處理實時熒光定量PCR的數(shù)據(jù)詳解 2022-6-6
實時熒光定量PCR數(shù)據(jù)中的基本概念：在整個擴增過程中會出現(xiàn)基線期，指數(shù)期，線性期和平臺期。其中在基線期和指數(shù)增長期，擴增產(chǎn)物都是以指數(shù)級增長，但是在基線期我們沒辦法檢測；而到了線性期和
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2670 次 PCR原理、PCR擴增影響因素及預(yù)防詳解 2022-5-10
PCR簡介聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR)是利用一段DNA為模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同參與下，將該段DNA擴增至足夠數(shù)量，以便進行結(jié)構(gòu)和功能分析的一種反應(yīng)。PCR擴增原理核
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6561 次 qPCR擴增過程中影響Ct值的因素及解決辦法詳解 2022-4-27
導(dǎo)讀Ct值是熒光定量PCR重要的結(jié)果呈現(xiàn)形式，它被用于計算基因表達量差異或者基因拷貝數(shù)。那么熒光定量的Ct值多大被認為是合理？如何保證Ct值的有效范圍呢？ Ct值以及Ct值的作用：Ct值概念：也稱
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4138 次 實驗過程中核酸降解的預(yù)防手段與方法 2022-4-14
導(dǎo)語在實驗過程中，最心累的莫過于好不容易提取的核酸卻降解了。那么核酸為什么會發(fā)生降解呢，我們又該如何預(yù)防呢？關(guān)于核酸降解，你了解多少呢？讓我們一起對核酸降解一探究竟吧。 什么是核酸
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2258 次 移取PCR Master Mix對qPCR結(jié)果的準確性的影響 2022-3-30
Overview定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）分析具有高靈敏度，這是其成功并廣泛應(yīng)用于科學(xué)實驗室的最重要原因之一。然而，包括移液技術(shù)在內(nèi)的許多因素都會對qPCR分析的結(jié)果產(chǎn)生影響。在進行基于PCR原理的
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